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目的:研究PI3K/AKT/mTOR双通道抑制剂NVP-BEZ235联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌细胞MKN-45的抑制作用,并初步探讨其可能机制。方法:1、分别以含8 nM、16 nM、32 nM、64 nM、125 nM、250 nM、500 nM、1μM NVP-BEZ235的RMPI-1640完全培养基培养胃癌细胞株MKN-45细胞,培养48小时后运用MTT法检测NVP-BEZ235对胃癌MKN-45细胞增殖能力的影响。2、分别以含4μM、8μM、16μM、32μM、64μM、125μM、250μM、500μM、1mM 5-FU的RMPI-1640完全培养基培养胃癌细胞株MKN-45细胞,培养48小时后运用MTT法检测5-FU对胃癌MKN-45细胞增殖能力的影响。3、分别以含200 nM、400 nM、800 nM NVP-BEZ235的RMPI-1640完全培养基,含40μM、80μM、160μM5-FU的RMPI-1640完全培养基及含200nM NVP-BEZ235+40μM 5-FU、400nM NVP-BEZ235+80μM 5-FU、800nMNVP-BEZ235+160μM 5-FU的RMPI-1640完全培养基培养胃癌细胞株MKN-45细胞,培养48小时后运用MTT法各组处理因素对胃癌MKN-45细胞增殖能力的影响。4、将细胞分为四个组:对照组(以含RMPI-1640完全培养基培养)一下简称Control组;NVP-BEZ235组(以含400 nM NVP-BEZ235的RMPI-1640完全培养基培养)以下简称BEZ组;5-FU组(以含80μM 5-FU的RMPI-1640完全培养基培养)以下简称FU组;联合用药组(以含有400 nM NVP-BEZ235和80μM 5-FU的RMPI-1640完全培养基培养)以下简称Comb组。运用Western blot检测细胞的自噬、凋亡水平;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;transwell小室检测细胞的迁移能力,克隆形成检测其增殖抑制能力。结果:1、NVP-BEZ235、5-FU分别以不同浓度的处理胃癌MKN-45细胞,培养48h后,结果显示,随着药物的浓度的不断增加,细胞增殖能力不断下降,呈浓度依赖性。2、两种药物按实验方案处理细胞48h后,与正常培养组相比,NVP-BEZ235、5-FU单独及联合作用均对人胃癌MKN-45细胞增殖具有抑制作用(P<0.01),并且随药物浓度的增加而增强;与两药单独作用比较,联合作用时抑制作用更加明显(P<0.01)。3、Western Blot见各组药物处理MKN-45细胞后PI3K/Akt/mTOR相关蛋白:Akt结果示,BEZ组显著低于Control组,Comb组显著低于FU组,差别具有统计学意义(P=0.00);p-Akt(308)相对表达量,BEZ组显著低于Control组,Comb组显著低于FU组,差别具有统计学意义(P=0.00);p-Akt(473)相对表达量显示,BEZ组显著低于Control组,Comb组显著低于FU组,差别具有统计学意义(P=0.00);mTOR相对表达量显示,BEZ组显著低于Control组,Comb组显著低于FU组,差别具有统计学意义(P=0.00)。凋亡相关蛋白Caspase3相对表达量显示,BEZ组显著高于Control组,Comb组显著低于FU组,差别具有统计学意义(P=0.00);Bax/bcl-2相对表达量,各处理组间差异不完全相等,BEZ组显著高于Control组,Comb组显著高于FU组差别具有统计学意义(P=0.00)。4、流式细胞仪检测各处理组间的细胞凋亡率。结果显示BEZ组MKN-45细胞的凋亡率明显高于Control组,Comb组胃癌MKN-45细胞的凋亡率明显高于FU组,差别具有统计学意义(P=0.00)。迁移细胞BEZ组MKN-45迁移细胞计数为(150.00±9.17个/视野)少于Control组(275.67±11.59个/视野);Comb组MKN-45迁移细胞计数为(47.33±8.14个/视野)少于FU组(200.00±25.16个/视野),差别具有统计学意义(P=0.00)。侵袭实验BEZ组MKN-45侵袭细胞计数为(150.00±9.17个/视野)少于Control组(275.67±11.59个/视野);Comb组MKN-45侵袭细胞计数为(47.33±8.14个/视野)少于FU组(200.00±25.16个/视野),差别具有统计学意义(P=0.00)。结论:1.NVP-BEZ235能够增加肿瘤细胞的凋亡,降低肿瘤细胞的迁移、侵袭能力。2.NVP-BEZ235与5-FU联合用药时,能够提高胃癌MKN-45细胞对5-FU的敏感性。3.NVP-BEZ235提高胃癌MKN-45细胞对5-FU的敏感性可能与PI3K/AKT/mTOR通路水平的活性降低有关。