高致病性禽流感（HPAI）是由H5和H7亚型禽流感病毒（AIV）引起的禽类急性高度致死性传染病,被国际兽疫局（OIE）列为A类疾病。该病的实验室诊断依赖于病毒分离、血凝（HA）和血凝抑制（HI）等试验,但所需的多抗血清的制备比较繁琐,不同批次间的质量差异大。本研究拟制备抗H5亚型AIV血凝素（HA）蛋白的单克隆抗体,并将其用于H5亚型AIV的检测中。 分别以H5亚型AIV SHC株及JSC株为免疫原,4次免疫8周龄BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0-Ag-14进行融合。通过HA和HI试验进行筛选,将获得的阳性细胞株用有限稀释法进行亚克隆,筛选稳定分泌单克隆抗体的细胞株。经3次亚克隆共获得6株针对HA蛋白的特异性单抗,其中2株是针对SHC免疫原的,命名为1C10和5H10;4株是针对JSC免疫原的,分别命名为2D2、2C8、3D3和3D11。以上单抗腹水的HI效价在2¹³～2¹⁵之间,间接ELISA效价在6×10⁴～5×10⁶之间。免疫球蛋白亚类试剂盒鉴定结果表明:2D2、3D11和1C10属于IgGI₁类,2C8和5H10属于IgG₃亚类,而3D3属于IgG^2a亚类。 特异性实验结果表明:该6株单抗只与H5亚型AIV发生特异性HI反应,而不与H1、H3、H4、H6、H9、H10和H11亚型AIV以及新城疫病毒（NDV）、传染性支气管炎病毒（IBV）和产蛋下降综合征病毒（EDS-76v）反应,显示出很好的亚型特异性。鸡胚中和试验结果表明:该6株单抗均可与HA作用从而阻止其与相应受体结合,导致病毒感染鸡胚能力的丧失,显示出很好的中和特性。