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目的:观察电针百会穴对次声暴露大鼠学习记忆能力的影响,探讨电针防治次声性学习记忆障碍的作用机制。
方法:根据Y型电迷宫测定的成绩,选取学习获得能力相近的48只清洁级成年雄性SD大鼠作为研究对象,采用随机数字表法将其随机分为空白组、次声组、百会组和非穴组,每组12只。空白组大鼠每日上午在无次声作用的次声仓中放置2h,次声组、百会组和非穴组大鼠每日上午暴露于8Hz、130dB次声仓中2h,每天1次,连续干预7天。百会组和非穴组在次声暴露结束后2h内给予电针干预,其中百会组参考《实验针灸学》中动物针灸穴位图谱取大鼠百会穴,非穴组针刺非经非穴点,两组均接G6805电针仪,选择疏密波,频率2/20Hz,电流强度(1~2)mA,每天1次,每次30min,连续干预7天。各组大鼠在实验的第1天开始进行Morris水迷宫适应性训练,第6天进行水迷宫定位航行实验,第7天进行水迷宫空间探索实验。实验第7天,水迷宫空间探索实验结束后,采用苏木精-伊红染色法(HE染色)和尼氏染色法观察大鼠海马区神经细胞的形态学改变,采用免疫组织化学法、免疫印迹法(WB)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠海马区苏氨酸-286位点上磷酸化的钙调依赖性蛋白激酶Ⅱ(pT286-CaMKⅡ)、Tau蛋白和丝氨酸-262位点上磷酸化的Tau蛋白(pSer262-Tau蛋白)的表达。
结果:
1.行为学检测结果:与空白组比较,次声组的水迷宫成绩显著下降(P<0.05);百会组与次声组比较,水迷宫成绩明显提高(P<0.05);非穴组与次声组比较水迷宫成绩差异无统计学意义。
2.细胞形态学检测结果:通过HE染色法和尼氏染色法发现,空白组大鼠海马CA1区和DG区的神经元形态饱满,尼氏小体丰富,排列整齐,结构完整;次声组和非穴组大鼠海马CA1区和DG区有大量的神经元紧缩深染,尼氏小体减少,排列较松散,神经元结构遭到不同程度的损害;百会组大鼠海马区有少量神经元紧缩深染,排列较整齐,尼氏小体较丰富,神经元结构损害较轻。
3.生化免疫指标检测结果:免疫组织化学染色结果显示,次声组与空白组相比大鼠海马CA1区和DG区pT286-CaMKⅡ、Tau蛋白及pSer262-Tau蛋白的表达量均明显增多(P<0.05);百会组与次声组比较,大鼠海马CA1区和DG区上述指标的表达量均有所下降(P<0.05);非穴组与次声组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。WB法结果显示,次声组大鼠海马区pT286-CaMKⅡ、pSer262-Tau蛋白的表达量(相对灰度)增多,与空白组比较差异具有统计学意义(P<0.05);百会组与次声组比较大鼠海马区pT286-CaMKⅡ、pSer262-Tau蛋白的表达水平明显下降(P<0.05);非穴组与次声组比较,大鼠海马区pT286-CaMKⅡ和pSer262-Tau蛋白的表达水平虽有轻度下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA法结果显示,次声组大鼠海马CA1区和DG区Tau蛋白的表达量(相对浓度)与空白组相比明显增多(P<0.05);百会组大鼠海马CA1区和DG区Tau蛋白的表达量比次声组明显减少(P<0.05);非穴组与次声组比较无显著差异(P>0.05)。
结论:电针百会穴可以提高次声暴露大鼠的学习记忆能力,减轻次声作用对大鼠海马区神经元的损害;其机制可能与电针百会穴干预了CaMKⅡ-Tau蛋白信号传导通路有关,即通过降低海马区CaMKⅡ的磷酸化水平而抑制海马区Tau蛋白的过度磷酸化。
方法:根据Y型电迷宫测定的成绩,选取学习获得能力相近的48只清洁级成年雄性SD大鼠作为研究对象,采用随机数字表法将其随机分为空白组、次声组、百会组和非穴组,每组12只。空白组大鼠每日上午在无次声作用的次声仓中放置2h,次声组、百会组和非穴组大鼠每日上午暴露于8Hz、130dB次声仓中2h,每天1次,连续干预7天。百会组和非穴组在次声暴露结束后2h内给予电针干预,其中百会组参考《实验针灸学》中动物针灸穴位图谱取大鼠百会穴,非穴组针刺非经非穴点,两组均接G6805电针仪,选择疏密波,频率2/20Hz,电流强度(1~2)mA,每天1次,每次30min,连续干预7天。各组大鼠在实验的第1天开始进行Morris水迷宫适应性训练,第6天进行水迷宫定位航行实验,第7天进行水迷宫空间探索实验。实验第7天,水迷宫空间探索实验结束后,采用苏木精-伊红染色法(HE染色)和尼氏染色法观察大鼠海马区神经细胞的形态学改变,采用免疫组织化学法、免疫印迹法(WB)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠海马区苏氨酸-286位点上磷酸化的钙调依赖性蛋白激酶Ⅱ(pT286-CaMKⅡ)、Tau蛋白和丝氨酸-262位点上磷酸化的Tau蛋白(pSer262-Tau蛋白)的表达。
结果:
1.行为学检测结果:与空白组比较,次声组的水迷宫成绩显著下降(P<0.05);百会组与次声组比较,水迷宫成绩明显提高(P<0.05);非穴组与次声组比较水迷宫成绩差异无统计学意义。
2.细胞形态学检测结果:通过HE染色法和尼氏染色法发现,空白组大鼠海马CA1区和DG区的神经元形态饱满,尼氏小体丰富,排列整齐,结构完整;次声组和非穴组大鼠海马CA1区和DG区有大量的神经元紧缩深染,尼氏小体减少,排列较松散,神经元结构遭到不同程度的损害;百会组大鼠海马区有少量神经元紧缩深染,排列较整齐,尼氏小体较丰富,神经元结构损害较轻。
3.生化免疫指标检测结果:免疫组织化学染色结果显示,次声组与空白组相比大鼠海马CA1区和DG区pT286-CaMKⅡ、Tau蛋白及pSer262-Tau蛋白的表达量均明显增多(P<0.05);百会组与次声组比较,大鼠海马CA1区和DG区上述指标的表达量均有所下降(P<0.05);非穴组与次声组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。WB法结果显示,次声组大鼠海马区pT286-CaMKⅡ、pSer262-Tau蛋白的表达量(相对灰度)增多,与空白组比较差异具有统计学意义(P<0.05);百会组与次声组比较大鼠海马区pT286-CaMKⅡ、pSer262-Tau蛋白的表达水平明显下降(P<0.05);非穴组与次声组比较,大鼠海马区pT286-CaMKⅡ和pSer262-Tau蛋白的表达水平虽有轻度下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA法结果显示,次声组大鼠海马CA1区和DG区Tau蛋白的表达量(相对浓度)与空白组相比明显增多(P<0.05);百会组大鼠海马CA1区和DG区Tau蛋白的表达量比次声组明显减少(P<0.05);非穴组与次声组比较无显著差异(P>0.05)。
结论:电针百会穴可以提高次声暴露大鼠的学习记忆能力,减轻次声作用对大鼠海马区神经元的损害;其机制可能与电针百会穴干预了CaMKⅡ-Tau蛋白信号传导通路有关,即通过降低海马区CaMKⅡ的磷酸化水平而抑制海马区Tau蛋白的过度磷酸化。