论文部分内容阅读
桃、李、杏及樱桃等核果类果树的许多种与品种原产我国,优异资源极为丰富。诸如中国樱桃自花结实,而欧李抗旱性极强。进一步采用远缘杂交技术等创造核果类果树新种质,增加遗传多样性,对于核果类果树种质资源的保护和利用具有重要意义。针对远缘杂交的不亲和性及杂种的不育性,本试验于2002～2003年在山东农业大学果树生物学实验室、泰安市司家庄果园、山东农业大学泰安横岭果树育种基地和泰安市化马湾乡进行。以‘养老’、‘那翁’及‘红灯’3个甜樱桃品种为母本,‘莱阳长把红樱桃’和‘平度长把红樱桃’2个中国樱桃品种为父本进行种间杂交。初步探索了不同杂交组合对坐果率的影响及杂种败育发生的时期,研究建立了甜樱桃与中国樱桃的种间杂种胚抢救技术体系,并对杂种胚培苗进行了S-allele specific PCR、RAPD和形态学鉴定,首次将一批远缘杂种胚培苗定植于大田,为进一步的育种及有关研究提供了种质。主要结果如下:1. 不同的杂交组合,坐果率差异显著。所有杂交组合中均以‘养老’为母本的坐果率最高,分别为13.92%和17.11%,这说明‘养老’与中国樱桃的杂交亲和性较高;而‘那翁’与中国樱桃的杂交亲和性最低,仅为1.39%和1.75%;‘红灯’与中国樱桃杂交亲和性居中,为2.29%和4.08%,并且甜樱桃与‘莱阳长把红樱桃’的杂交坐果率均高于‘平度长把红樱桃’。樱桃授粉后两周内坐果率急剧下降,此时杂种胚尚未形成,因此主要原因是受精前杂交不亲和。‘养老’与中国樱桃杂交授粉后第3周与第4周坐果率差异不大,表明其有一定程度的远缘杂交亲和性,能够完成双受精,形成胚。而第4周后坐果率急剧下降,研究发现,第4周时,杂种果实与自然授粉果实尚无明显差异。而授粉后第5周杂种胚发生败育现象,杂种果实明显变小,并陆续脱落。以‘那翁’和‘红灯’为母本的杂交组合则在第4周发生胚败育现象。2. 对自然授粉的甜樱桃胚进行不同时间长度的次氯酸钠灭菌,结果表明10min的次氯酸钠灭菌时间比6min灭菌效果要好一些;经过长期低温处理后,未去种皮的甜樱桃胚与去种皮的相比,胚培养一段时间后仍能萌发生长,但是初期萌发相当缓慢,故剥去种皮对甜樱桃胚培养还是有一定必要的。 <WP=6>3. 对‘养老’甜樱桃ב莱阳长把红樱桃’杂交组合的不同胚龄的胚进行萌发及生长试验,结果表明:胚龄对胚培养的影响较大,胚龄越长,胚的萌发及胚培苗的生长率越高,杂交授粉后35 d 为未成熟胚萌发及生长的有效时期,杂种胚的萌发及生长率可达到60%以上,授粉后28d 由于PF(embryo length/seed length)值较小,接种后杂种萌芽率极低,大田移栽后未能成活。4. 当培养基中加入维生素C和活性炭时,有利于抑制胚的褐化,虽然前人许多试验证明活性炭对试管苗的生长具有良好的促进作用,但从本试验的结果来看,加活性炭的效果明显不如加Vc的效果好,而且同样是加Vc的培养基配方中,加10mg.L-1的Vc比加5mg.L-1防止褐化效果要好的多。5. 通过对大量培养基配方的筛选,建立了适合杂种胚培养的技术体系。最佳萌发与生长培养基为1/2 MS+BA 2 mg·L-1+IAA 1 mg·L-1+维生素C 10 mg·L-1,最佳继代增殖培养基为1/2 MS+BA 2 mg·L-1+IAA 1 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+维生素C 10 mg·L-1,最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.2 mg·L-1+维生素C 10mg·L-1。6. 不同移栽时期的杂种试管苗成活率存在一定差异,试验结果表明:10月下旬移栽成活率最高,达87.10%,且杂种苗生长状况良好,而11月下旬移栽成活率最低,仅为8.57%。7. 对胚培养得到的‘养老’ב莱阳长把红樱桃’、‘养老’ב平度长把红樱桃’杂种幼苗,进行S-allele specific PCR、RAPD及叶片形态鉴定,电泳谱带分析及叶片形态分析表明,所得苗木确系杂种。8. 首次将100余株中国樱桃与欧洲甜樱桃的种间杂种胚培苗成功定植于田间,为进一步的育种及有关研究提供了种质。