玉屏风多糖脂质体在雏鸡小肠吸收特性及免疫效应研究

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玉屏风多糖(Yupingfeng Polysaccharides,YPF-P)是玉屏风散的有效部位群,在调节免疫、抗应激、抗病毒以及抗疲劳等方面发挥着重要作用。传统的YPF-P制剂存在着易被氧化分解、受潮易变质以及不易吸收等缺陷。脂质体(Liposome)是由胆固醇和磷脂组成的,具有类似生物膜双分子层结构的超微球型载体,具有良好的稳定性、缓释作用以及生物组织相容性等,是一种极具开发潜力的新型给药载体。本试验通过自行制备YPF-P和玉屏风多糖脂质体(Yupingfeng polysaccharides liposomes,YPF-PL),研究YPF-PL对雏鸡的口服吸收特性以及免疫效应的影响,具体内容如下:(1)试验通过水提醇沉法和大孔树脂的分离纯化,制备YPF-P,再利用逆相蒸发法制备YPF-PL,并采用苯酚-硫酸法分别测定多糖含量和脂质体的包封率。(2)采用雏鸡在体循环灌流模型,并建立了检测YPF-P及其脂质体的HPLC分析方法,分别考察雏鸡十二指肠、空肠、回肠以及小肠全肠段对YPF-PL和YPF-P的吸收特性,通过检测循环回路中不同时间段的药物含量,求得各吸收动力学参数,即吸收速率常数Ka、累计吸收转化率A、药物吸收半衰期T1/2、以及表观渗透系数Papp。(3)将150只13日龄麻黄雏鸡随机分为5组,分别为YPF-PL高、中、低剂量组(400、200、100 mg/kg)、YPF-P组(200 mg/kg)和空白对照组,试验1-7 d和14-21 d将药物混于饲料给药,并在试验第4 d和17 d各组均免疫接种禽流感H5灭活苗。每周检测禽流感的抗体效价,在试验第14 d和28 d利用ELISA试剂盒检测外周血GM-CSF、G-CSF和M-CSF的质量浓度和流式细胞仪检测外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞比例和Bu-1+B淋巴细胞比例。结果显示:(1)YPF-P的含量为92.57%,YPF-PL的包封率为86.66%。(2)YPF-PL和YPF-P在雏鸡十二指肠、空肠、回肠以及小肠全肠段都有不同程度的吸收;小肠全肠段考察中,雏鸡对YPF-PL的总吸收量显著高于YPF-P(P<0.05),雏鸡小肠对YPF-PL的吸收速率常数、转化率和表观渗透系数比传统剂型的YPF-P分别提高了35%、26%和20%,吸收半衰期缩短了26%,且均具有显著性(P<0.05);在不同肠段考察中,YPF-PL和YPF-P吸收速率常数Ka和吸收转化率的大小顺序均为空肠>回肠>十二指肠,且与传统剂型的YPF-P相比,YPF-PL在十二指肠、空肠、回肠的吸收速率常数Ka分别提高了17%、28%、12%,吸收转化率分别提高15%、23%、19%,且在相同肠段中,对YPF-PL的吸收均极显著高于YPF-P(P<0.01)。(3)YPF-PL高剂量组在试验第35 d抗体效价升至最高,但与对照组相比,差异不显著(P>0.05);试验第14 d,YPF-PL高剂量组各集落刺激因子水平均显著高于对照组(P<0.05),YPF-PL中、高剂量组CD4+、CD8+T淋巴细胞比例极显著高于对照组和YPF-P组(P<0.01),YPF-PL中剂量组Bu-1+B淋巴细胞比例极显著高于其余各组(P<0.01);试验第28 d,YPF-PL中剂量组各集落刺激因子水平均极显著高于对照组、YPF-P组和YPF-PL低剂量组(P<0.01),YPF-PL高剂量组CD4+和CD8+T淋巴细胞比例显著或极显著高于对照组和YPF-P组(P<0.05,P<0.01),YPF-PL高剂量组Bu-1+B淋巴细胞比例极显著高于其余各组(P<0.01)。课题组制备的YPF-P和YPF-PL均符合质量控制标准。与传统剂型的YPF-P相比,YPF-PL因为其结构和功能的特殊性,口服吸收更迅速,吸收的量更多,提高了生物利用度,且一定剂量的YPF-PL能有效提高雏鸡外周血GM-CSF、G-CSF和M-CSF水平以及CD4+、CD8+T淋巴细胞比例和Bu-1+B淋巴细胞比例。
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