随着养猪产业朝着集约化、工厂化的发展,疫病防控始终是生猪产业健康发展的重要课题之一。而在疫病防控中,呼吸道病的及时诊断与防治是重中之重。虽然免疫工作已经普及,但疫病仍然威胁着生猪产业。并且疾病暴发多呈几种疾病同时或相继发生的特点,因而及时快速诊断对疾病的发现与控制是最有效的防控措施。一些可能会导致猪群大范围流行的呼吸道疫病成为防治重点。猪伪狂犬病毒（Porcine pseudorabies virus,PRV）、猪圆环病毒（Porcine circovirus type 2,PCV2）及猪繁殖与呼吸障碍病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）在猪群的临床养殖上常呈现混合感染,并且PCV2和PRRSV的感染会导致猪的机体产生免疫抑制,加之PRRSV与PRV均表现出类似的呼吸道症状。因此,如何准确的针对这些病原进行快速、精确的诊断,从而尽早对疫病进行防治,对养猪产业的发展具有重要意义。TaqMan探针荧光定量PCR检测方法由于探针的加入,使得其相较于其它传统的检测方法具有高灵敏性和高特异性的优点,可以广泛应用于临床上的病原诊断。本研究建立一种PRV、PCV2及PRRSV多重实时定量PCR检测方法,从而实现对临床上PRV、PCV2及PRRSV混合感染的快速诊断。为此,我们进行了以下研究:（一）建立了PRV、PCV2、PRRSV的单重荧光定量PCR检测方法。根据PRV的UL27基因、PCV2的Cap基因、PRRSV的ORF7基因的相对保守的基因序列区进行特异性引物设计,并将扩增所得的目的基因的片段克隆到PUC19空载体中,从而构建各个病毒的重组质粒标准品。尔后使用梯度稀释标准品进行单重荧光定量PCR扩增,针对扩增循环制作标准曲线,最终构建了各个病毒的单重荧光定量检测方法。另外,使用该方法对各个病原的敏感性检测发现PRV、PCV2、PRRSV的敏感性分别为32copies/μL、23copies/μL以及51copies/μL。并且除敏感性高外,该方法还拥有较强的重复性和特异性。（二）建立了可同时进行PRV、PCV2、PRRSV检测的多重荧光定量PCR方法。根据各个病原所构建的单重荧光定量PCR方法的反应体系和反应条件,利用上述构建完成的标准品作为模板,通过对反应条件和体系进行调节后,建立了PRV、PCV2及PRRSV的多重荧光定量PCR检测方法。使用该方法对病毒进行敏感性检测,结果发现PRV、PCV2、PRRSV的检测下限分别为71、35以及67copies/μL。且平行检测的组内及组间的变异系数均不大于1%。证明该方法不仅具有良好的敏感性,还具有良好的可靠性。（三）使用建立的多重TaqMan荧光定量PCR方法对临床检测进行应用效果评价。结果发现其与临床广泛应用的国标常规PCR凝胶电泳方法相比PRV、PCV2及PRRSV病原的阳性检出符合率均可达91.94%以上。证明了该方法具备良好的临床应用前景。总之,该研究建立的PRV、PCV2、PRRSV的单重、多重荧光定量PCR方法能够快速、准确的对这几种猪群常见这几种疫病进行快速检测,在临床上具有很高的应用价值。