黑木耳(Auricularia heimuer)为我国主要栽培的食用菌种类,兼具经济价值和生态价值。近年来,随着组学的快速发展,研究黑木耳在不同试验条件下基因表达的变化差异,筛选并挖掘相关功能基因成为黑木耳遗传育种工作的重要内容之一。但是,由于黑木耳在内参基因研究方面的缺失,严重影响了其相关重要功能基因表达等方面的研究,阻碍了黑木耳遗传育种工作的开展。因此,本研究以黑木耳不同菌株(栽培菌株AR1和AR2,野生菌株AR3)、不同生育期(菌丝体、原基和子实体)、不同胁迫条件(4℃、30℃和p H=9)和不同营养条件(葡萄糖、蔗糖、淀粉、酵母浸粉和蛋白胨)的样品为试验材料,提取RNA,反转录成c DNA。在全基因组注释结果的基础上,选择10个候选内参基因(APRTase、β-TUB、RPL2、EF-1a、EF-2、H+-ATPase、Tspd、TUB-1a、18S r RNA和28S r RNA)并设计跨内含子的引物,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术进行扩增,利用ge Norm、Norm Finder、Best Keeper和ΔCt算法以及综合评价软件Ref Finder,筛选适宜的内参基因。以供试菌株“AR2”在PDA培养基培养的菌丝体为对照,结合已筛选出的内参基因,利用qRT-PCR技术对木质素分解酶基因和多糖合成关键酶基因在不同试验条件下的差异表达情况进行解析,旨在为黑木耳在不同试验条件下重要功能基因的表达奠定基础,促进黑木耳功能基因的挖掘与利用,由此推动黑木耳遗传育种相关研究。主要结果如下:1、本研究利用qRT-PCR技术筛选黑木耳在不同试验条件下的内参基因。筛选出不同菌株的内参基因为18S r RNA、β-TUB、EF1-a、28S r RNA,在栽培菌株和野生菌株中均适用;不同生育期的内参基因为APRTase、18S r RNA、28S r RNA;不同营养条件下的内参基因为APRTase、β-TUB和EF1-a;不同胁迫条件下的内参基因为18S r RNA和β-TUB。2、本研究以不同生育期的内参基因(APRTase、18S r RNA、28S r RNA)对10个黑木耳木质素分解酶基因(Lac1、Lac2、Lac3、Lac4、Lac5、POX1,POX2、POX3、POX4、POX5)的表达量进行校正和标准化,解析其在不同生育期的差异表达情况。结果表明:(1)Lac1、Lac3、POX1和POX4在菌丝体时期相对表达量最高,显著高于原基期和子实体时期。(2)Lac2基因在菌丝体营养阶段和原基阶段的相对表达量显著高于子实体阶段。(3)POX2和POX3在原基期相对表达量显著高于菌丝体时期和子实体时期。(4)Lac4与Lac5在菌丝体和子实体时期的相对表达量显著高于原基期。(5)POX5基因在黑木耳整个生育期都具有较高的表达水平。3、本研究以25℃条件下,AR2菌株在PDA培养基培养的菌丝体为对照,利用qRT-PCR技术分析多糖合成关键酶基因(PGI、PGM和UGPase)在黑木耳不同试验条件下差异表达情况。结果表明:(1)UGPase在子实体阶段的相对表达量高于原基期和菌丝体时期,PGI和PGM在菌丝体时期的相对表达量高于原基期和子实体时期。(2)PGI在葡萄糖、淀粉、蔗糖、酵母浸粉和蛋白胨等营养条件下的相对表达量分别是对照组的41倍、10倍、14倍、103倍和5倍;UGPase在葡萄糖和蛋白胨条件下的相对表达量分别是对照组的1倍和5倍。PGM在不同营养条件的相对表达量均低于对照组。(3)PGI在4℃、30℃和p H=9等不同胁迫条件的相对表达量分别是对照组的10倍、4倍和6倍。UGPase和PGM的相对表达量均低于对照组。