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研究背景和目的外眦区域的皱纹,又称鱼尾纹,是面部皮肤老化最常见且最早出现的皱纹,是门诊面部诉求中最常见的皱纹,它是指微笑时由外眦区域放射而出的皮肤纹理,随着年龄的增加,在静止休息时也出现。静态鱼尾纹指面部表情静止时外眦区域呈现的皱纹,而动态鱼尾纹指面部最大微笑时外眦区域呈现的皱纹。皱纹的产生与皮肤胶原和弹力纤维的大量丢失与重排、反复的面部表情肌运动有关,另外年龄增加、日光暴露、吸烟等也可降低皮肤弹性形成皱纹,促使鱼尾纹产生的主要是眼轮匝肌收,还有嘴角提肌、笑肌、颧肌也参与其产生。A型肉毒毒素是革兰氏阳性梭状芽孢杆菌在无氧条件下繁殖过程中产生的七种外毒素中的一种,它用于面部注射除皱已有20余年历史。在应用过程中,很多临床医生均发现多点皮内注射后面部皮肤质地明显改善,但其原因不明。2012年,Sang-Ha Oh等学者进行了体外正常人成纤维细胞研究,发现A型肉毒毒素可以显著提升新胶原水平,减少胶原降解。2014年,本研究小组F.Permatasari对于UVB所致光老化的人成纤维细胞进行了体外研究,发现A型肉毒毒素可以使该种细胞表达β-半乳糖苷酶的老化细胞比率下降,促使其新胶原水平上升,MMPs水平下降,从而降低胶原的降解,对于UVB辐射所提高的抑癌和老化相关蛋白都有一定程度的下降。2016年本研究小组朱洁等评估BTX-A皮下注射用于面部嫩肤的疗效,实验中BTX-A组在治疗后12周时显示出较高的医师整体评估评分,受试者满意度评分,光滑度,皮肤含水量,皮肤弹性和较低的经表皮水分流失。A型肉毒毒素的直接抗皮肤老化作用在体内予以证实,但A型肉毒毒素直接抗皮肤老化的具体机制尚不清楚。微针在皮肤角质层造成很多孔道,使得药物渗透更快。微针透皮给药集合了皮下注射与透皮贴片释药双重效果。本次研究使用的纳米微针与微针的工作原理相同,但尺寸较小,在纳米尺寸范围内,较传统微针皮肤屏障功能恢复更快,对皮肤的刺激性更小,可提供更大的特异性、渗透性和可控释放。本研究为纳米微针促透技术联合A型肉毒毒素溶液治疗的应用观察,分为两部分。第一部分为A型肉毒毒素治疗鱼尾纹三种方式疗效的比较研究;第二部分为纳米微针促透技术联合外用A型肉毒毒素溶液对于BALB/c裸鼠皮肤胶原生成的影响。第一部分 A型肉毒毒素治疗鱼尾纹三种方式疗效的比较研究研究方法根据the IGA-LCL 5分分级评分法选择30名中重度鱼尾纹的女性受试者接受A型肉毒毒素治疗。随机分为三组:每组10人,分别为传统肌肉注射组、真皮内微滴注射组以及纳米微针联合BTX-A组,所有受试者双侧鱼尾纹部位均给予BTX-A（7U/侧）,共14U,分别在上述处理后第1周、4周、12周进行临床观察记录,并用皮肤生理功能检测仪来分析受试部位皮肤胶原含量、弹性、皮肤含水量及油脂含量。结果肌肉注射组及真皮内注射组对于动态鱼尾纹的疗效优于纳米微针组（P＜0.05）,而真皮内注射组及纳米微针组对静态鱼尾纹有一定疗效（P＜0.05）,但肌肉注射组对静态鱼尾纹无效（P＞0.05）。其中真皮内注射组及纳米微针组在处理后1周、4周时的皮肤弹性、胶原含量及皮肤含水量均高于肌肉注射组（P＜0.05）,在12周时真皮内注射组的皮肤弹性、胶原含量及皮肤含水量均高于肌肉注射组及纳米微针组（P＜0.05）,而皮肤皮脂含量在处理前后各时间点三组间无明显差异（P＞0.05）。结论纳米微针联合BTX-A外用和真皮微滴注射BTX-A均可有效治疗鱼尾纹。第二部分 纳米微针联合A型肉毒毒素外用对BALB/c裸鼠皮肤胶原生成的影响研究方法将20只13月龄老龄期雌性BALB/c裸鼠背部双侧皮肤,随机分为4组:空白对照组、10U/mlBTX-A溶液外用组、纳米微针+NS组、纳米微针+10U/ml BTX-A组,每组10个样本量。纳米微针在BALB/c裸鼠的背部皮肤上从头部至尾部来回治疗共5次,处理后立即分别湿敷NS0.5ml或10U/ml的BTX-A0.5ml（5U）20分钟,隔日处理一次,共6次,于末次处理后2周处死裸鼠每组各10只,取其背部皮肤分别用HE染色观察裸鼠背部真皮厚度改变,masson染色观察裸鼠背部真皮胶原含量改变,免疫组化检测裸鼠背部皮肤COL-I、COL-3的表达情况,实时定量RT-PCR检测裸鼠背部皮肤COL-I、COL-3、MMP-3、MMP-13的mRNA表达情况。结果1、HE染色显示各组表皮层未见明显变化,纳米微针+BTX-A组及纳米微针+NS组真皮层较空白对照组增厚（P＜0.05）,纳米微针+BTX-A组的真皮厚度增加较纳米微针+NS组更为明显（P＜0.05）,而单独使用BTX-A溶液外用组与空白对照组比较无显著统计学差异（P＞0.05）。2、masson染色结果表明两个纳米微针组胶原含量均较空白对照组增（P＜0.05）,其中纳米微针处理后外用BTX-A组的真皮胶原含量增加较外用NS组更为明显（P＜0.05）。而单独外用BTX-A溶液组较空白对照组比较无统计学差异（P＞0.05）。3、免疫组化结果显示两个纳米微针组皮肤COL-1、COL-3含量较空白对照组增高（P＜0.05）,其中纳米微针处理后外用BTX-A组较纳米微针处理后外用NS组更为明显（P＜0.05）,单独BTX-A溶液外用组较空白对照组无明显统计学差异（P＞0.05）。4、实时定量RT-PCR检测结果示两个纳米微针组皮肤COL-1、C0L-3的mRNA的表达较空白对照组均上调（P＜0.05）,纳米微针处理后外用BTX-A较外用NS组上调更为明显（P＜0.05）,而单独外用溶液组较空白对照组无统计学差异（P＞0.05）。而纳米微针+BTX-A组的MMP-3、MMP-13的mRNA的表达水平较其它三组比较均明显下调（P＜0.05）,其余三组组间无明显差异（P＞0.05）。结论纳米微针联合生理盐水和纳米微针联合A型肉毒毒素外用均可增加裸鼠皮肤内胶原合成的促进作用,进而促进真皮重塑发挥抗皮肤老化作用,其中纳米微针联合A型肉毒毒素外用效果更显著,而单纯外用10U/ml A型肉毒毒素溶液对裸鼠皮肤无直接抗老化作用。