结核分枝杆菌（Mycobacterium Tuberculosis，MTB），是由德国科学家Koch于1882年发现，并证明其为结核病的病原体。随着卫生状况的改善以及抗结核药物的不断发展，曾令结核病的发病率和病死率大幅度下降，然而80年代后，由于艾滋病（AIDS）的流行使结核病再度活跃。近年来，结核病的疫情呈现复苏的趋势，俨然成为传染病中的头号杀手和首要死亡病因。利福平（RFP）是通过特异地与RNA聚合酶β亚基结合，从而抑制RNA聚合酶活性，并干扰分枝杆菌RNA的转录及合成，最终阻碍蛋白质合成来发挥抗菌作用的。研究表明，90％以上结核杆菌耐RFP都是由于其作用的靶分子RNA多聚酶β亚单位的编码基因（rpoB）发生突变所致。目前检测结核分枝杆菌主要依靠涂片、培养加药敏、PCR技术等多项传统试验进行综合分析，其操作复杂、耗时长，敏感以及特异性差，易导致误诊和漏诊的发生，延误治疗的同时又加重了病人额外的经济负担。本实验采用反义抑制PCR的方法，检测结核杆菌rpoB基因531以及526位点的突变，显示当野生反义上游引物的浓度大于10μM时，可完全抑制野生型质粒DNA的PCR扩增；在此条件下，观察到最低检出浓度为1-5×103（IU/ml），其性能完全可以满足临床标本检测的需要。使用本方法对临床182例结核病患者进行检测，并与传统的培养加药敏法，以及PCR直接测序法结果进行比较。结果显示本方法、药敏法以及直接测序法所测得有rpoB基因突变分别为64例，63例，60例。本方法与直接测序法结果经卡方检验，统计学分析,结果显示两种方法检测差异无统计学意义，说明本反义抑制PCR检测方法检测准确可靠。