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目的:由于NLRP3炎性体介导的炎症反应在各种肾脏疾病进展中的关键作用,靶向NLRP3炎性体将是减轻肾脏炎症反应的有效途径,溶酶体损伤是触发NLRP3炎性体激活的经典途径。氟非尼酮（AKFPD）作为一种新型小分子药物,具有广泛明确的抗炎作用,然而其机制尚不明确。本研究通过构建小鼠腹腔源性巨噬细胞（PDM）和人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2）炎症模型,观察氟非尼酮（AKFPD）治疗前后PDM及HK-2细胞中NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β、CTSB等蛋白表达及溶酶体数量的差异,探讨AKFPD通过溶酶体途径抑制NLRP3炎性体活化从而发挥其抗炎作用的机制。方法:1.细胞炎症模型构建及分组（1）LPS+ATP刺激模型:以BALB/c小鼠提取的原代腹腔巨噬细胞（PDM）为研究对象,采用LPS（500ng/ml,180min）+ATP（5m M,30min）诱导建立炎症模型（加入LPS后作用2.5h再加ATP共同孵育30min）。将实验分为三组:正常组（N）、模型组（LPS+ATP）、氟非尼酮治疗组（AKFPD）。治疗组使用AKFPD（400μg/ml）预处理24h后再行造模。（2）缺氧诱导损伤模型:以人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2）为研究对象,细胞在缺氧条件下（1%O2、94%N2和5%CO2）、无营养物质的培养基中培养12h以诱导缺氧损伤,然后将细胞转回有氧气的常规培养基中培养6h以促进复氧,构建缺氧/复氧（H/R）损伤模型。将实验分为三组:正常组（N）、模型组（H/R）、氟非尼酮治疗组（AKFPD）。治疗组使用AKFPD（400μg/ml）预处理24h后再行造模。2.采用q PCR检测小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β表达,采用Western-blot观察细胞中NLRP3、ASC、pro-caspase-1、pro-IL-1β、caspase-1（p10）和IL-1β（p17）的表达,免疫荧光共聚焦检测NLRP3及ASC共定位。3.Lyso-Tracker Red示踪标记观察PDM、HK-2细胞内溶酶体表达情况。4.采用Western-blot检测原代巨噬细胞、HK-2细胞中溶酶体组织蛋白酶B（CTSB）的水平,特异性活性测定试剂盒检测CTSB蛋白活性,免疫荧光共聚焦检测CTSB及NLRP3的共定位。结果:1.q PCR结果显示,与正常组相比,LPS+ATP刺激的PDM可见IL-1βm RNA表达水平升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;而AKFPD预处理后巨噬细胞IL-1βm RNA表达较模型组下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.WB结果显示,与正常组相比,模型组巨噬细胞、HK-2细胞中NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β的表达明显升高,使用AKFPD预处理后上述蛋白表达较模型组显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;免疫荧光共聚焦显示,ASC、NLRP3共定位在细胞质,与正常组相比,模型组巨噬细胞、HK-2细胞ASC、NLRP3水平升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;而治疗组巨噬细胞、HK-2细胞ASC、NLRP3表达相较于模型组降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。3.免疫荧光结果显示,与正常组相比,模型组巨噬细胞、HK-2细胞溶酶体表达升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,使用AKFPD预处理后巨噬细胞、HK-2细胞溶酶体表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。4.WB及免疫荧光结果显示,模型组巨噬细胞、HK-2细胞CTSB的水平及活性相较于正常组明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;而治疗组巨噬细胞、HK-2细胞CTSB的水平及活性相较于模型组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。免疫荧光共聚焦显示,CTSB、NLRP3共定位在细胞质,与正常组相比,模型组巨噬细胞、HK-2细胞CTSB、NLRP3水平升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;而治疗组巨噬细胞、HK-2细胞CTSB、NLRP3表达相较于模型组降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.氟非尼酮可抑制NLRP3炎性体激活,减少炎症细胞因子IL-1β的释放,下调炎症反应;2.氟非尼酮能够显著降低CTSB活性及水平,且使用AKFPD处理后的巨噬细胞及HK-2细胞CTSB、NLRP3共定位表达降低,表明氟非尼酮可能通过溶酶体组织蛋白酶途径抑制NLRP3炎性体活化。