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研究背景白血病患者长期生存率低,而难治/复发是导致白血病患者长期生存率低的主要因素。嵌合抗原受体修饰T(chimeric antigen receptor T cells,CAR-T)细胞疗法是近年来新型靶向免疫疗法,随着CD19-CART细胞在难治/复发B细胞白血病中的应用,虽然取得的疗效显著优于常规疗法,但缓解后复发是制约CAR-T细胞疗效的瓶颈,而微小残留病变(minimal residual disease,MRD)是复发的根源。在低瘤负荷的情况下,靶向肿瘤抗原的树突状细胞(Dendritic cells,DCs)可激活免疫杀伤细胞清除MRD,同时产生长期特异性抗肿瘤的免疫记忆细胞,从而预防肿瘤复发。表皮生长因子受体通路底物8(epidermal growth factor receptor pathway substrate 8,Eps8)在白血病患者中异常高表达,能够作为MRD监测及治疗的新靶标。在课题组的前期研究中,发现靶向肿瘤抗原Eps8的DC疫苗可有效提高CAR-T细胞的增殖潜力,增加中央记忆T细胞比例,增强CAR-T细胞的免疫功能。研究方法1.Eps8抗原肽致敏DCs的制备,并进行活性、纯度、表型和微生物的鉴定;2.利用混合淋巴细胞反应、体外杀伤效应、ELISA和ELISPOT细胞因子分泌、MHC四聚体检测抗原特异性T细胞的水平对Eps8抗原肽致敏的DCs进行免疫学效应评估;3.筛选入组患者将患者分为两组,对照组患者输注CAR-T细胞,研究组患者输注CAR-T细胞和Eps8抗原肽致敏的DCs,监测两组患者的临床不良反应,肝肾功能和血常规等安全性指标;4.骨髓涂片检测骨髓原始细胞数、流式细胞术监测MRD、qPCR监测体内CAR-T细胞数、MHC四聚体检测体内抗原特异性T细胞,评估CAR-T细胞联合Eps8抗原肽致敏的DCs治疗的客观缓解率、完全缓解率、总体生存时间、无病生存时间等疗效指标。研究结果成功制备负载Eps8的DC疫苗,Eps8抗原肽致敏的DCs体外诱导CTLs杀伤率达60%,显著增加细胞因子IL-12p70、IFN-γ的分泌水平,提高了抗原特异性T细胞的比例,具有良好的免疫功能和诱导抗肿瘤免疫应答的能力。研究入组难治复发急性白血病患者10例,其中5例患者接受CAR-T细胞联合Eps8抗原肽致敏的DCs治疗,5例患者接受单CAR-T细胞治疗,明确联合治疗较单CAR-T细胞治疗未见明显增加治疗的不良反应,无DC疫苗相关的不良反应发生。CAR-T细胞联合Eps8抗原肽致敏的DCs治疗组CAR-T细胞在体内中位持续时间为208天,显著高于单CAR-T细胞治疗组的21天。单CAR-T细胞治疗组3人完全缓解,其中2人MRD阴性完全缓解,中位无病生存时间为29天;CAR-T细胞联合Eps8抗原肽致敏的DCs治疗组5人均达到完全缓解,其中MRD阴性完全缓解4人,中位无病生存时间为332天,较单CAR-T细胞组显著延长患者无病生存时间。结论综上所述,本研究成功制备负载Eps8肿瘤抗原肽的DC疫苗,CAR-T细胞联合负载Eps8肿瘤抗原肽DC疫苗联合治疗难治复发急性白血病具有临床安全性,靶向Eps8肿瘤抗原的DC疫苗可增加CAR-T细胞疗效,延长患者无病生存时间。