随着转基因技术的发展和应用，尽管这项技术有着巨大的潜在效益，但人们也逐渐认识到其可能带来的负面效应。克隆动物及器官移植作为人类延续生命的重要技术而受到广泛关注，同时又与转基因动物安全性密切相关。因猪及其肾脏在生理学上与人体器官存在的类似性，所以能够作为一种重要的动物模型，成为目前研究最多的供体动物和供体器官。在获得克隆产物后，外源基因尤其是选择标记基因的去留问题成为了人们关注的交点。为了最大限度地降低选择标记基因带来的潜在风险，就需要对外源基因进行选择性的删除。本实验利用位点专一性重组系统，尝试构建含有重组酶识别位点的质粒，并以猪肾上皮细胞为研究材料，进行删除实验并验证其删除效果。　　 主要研究结果包括：　　 （1）根据试验需要，设计中间为多克隆位点、两侧为双重组酶识别为点(CreFLP)的序列，并首次利用重叠延伸PCR技术得到全长211bp的目的片段，克隆目的片段到Pmd18-T Simple骨架载体上;　　 （2）分别以pcDNA3.1、Pegfp-N3、Pires质粒为模板，扩增选择标记基因：新霉素抗性基因（neomycin）、增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP），强启动子基因（CMV）和内部核糖体进入位点（IRES）序列;　　 （3）将获得的两个选择标记基因（Neomycin和EGFP）以分别单独启动子表达的形式和IRES介入的同时表达的形式连接到含有目的片段的骨架载体上；　　 （4）以（3）中获得的两个载体为骨架，替换掉Cre重组酶识别位点，得到另外两个只含有FLP重组酶识别位点的载体，成功共得到不同识别位点和不同蛋白表达方式的四种目的载体；　　 （5）首次尝试以猪肾上皮细胞（PK15）为材料，转染上述四种质粒，G418筛选获得了稳定表达的单克隆细胞系，证明了构建的载体成功的表达了选择标记基因；　　 （6）二次转染FLP重组酶质粒，传代3次后提取转染后细胞的RNA和对照组RNA，通过RT-PCR反应得到Cdna模板；　　 （7）应用相对定量PCR反应验证选择标记基因删除前后在表达量上的变化，结果差异显（P<0.05）。