青蒿的质量标准研究

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青蒿为菊科植物黄花蒿(Artemisia annue L.)的干燥地上部分,为我国传统中药。2010年版一部《中国药典》收载其应该在秋季花盛开时采割,除去老茎阴干。而其中对于青蒿的质量评价主要是围绕植物形状、鉴别以及水分灰分和药理作用。为了系统全面的控制青蒿的质量,本论文优化了青蒿多糖、总黄酮的提取方法,建立了高效液相色谱法同时测定青蒿中的东莨菪碱、香豆素、木犀草素、槲皮素和山奈酚的含量的方法,优化了青蒿中青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸的提取及含量测定方法,在此基础上对不同产地的青蒿中以上各有效成份的含量进行分析,制定出了较为完善的青蒿质量标准。主要研究结果如下:1青蒿药材中多糖含量的测定以葡萄糖为对照品,用硫酸-苯酚法进行显色,采用紫外分光光度法在490nm波长处测定了青蒿中多糖的含量。其回归方程为:Y=16.050X+0.0737,(R2=0.9978)。通过测定四个省份22个不同产地25批样品,初步确定青蒿多糖在相应药材中的含量应不得低于4.0%。2青蒿药材中总黄酮含量的测定采用星点设计-响应曲面法优化了青蒿总黄酮的提取方法,得到其最佳提取工艺为:提取时间45min、甲醇浓度80%、料液比1:55;用优化了的提取方法提取青蒿总黄酮,以芦丁为对照品,用亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠进行显色,采用分光光度法在504nm处测定青蒿中总黄酮含量。回归方程为:Y=1.3130X-0.573,(R2=0.9986)。通过测定四个省份40个不同产地青蒿药材,初步确定青蒿总黄酮在相应药材中的含量不得低于2.0%。3青蒿药材中青蒿素、青蒿乙素、青蒿酸的HPLC-UV-ELSD同时测定采用Welch Ultimate(?)XB-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.1乙酸水(60:40)为流动相,流速1.0mL·min-1;柱温25℃;青蒿酸和青蒿乙素用紫外检测器检测,波长210nm,青蒿素用蒸发光散射检测器检测,漂移管温度50℃,载气(N2)压力30psi(1psi=6.9kpa),曾益值为50,进样体积为30uL。在上述条件下,青蒿素、青蒿乙素、青蒿酸色谱峰与杂质色谱峰分离良好。并进行方法学考察,回归方程为:青蒿素Y=1.7609X+14.078(R2=0.9948),青蒿乙素Y=21136X+12.357(R2=1.0000),青蒿酸Y=18195X-3.4293(R2=0.9997),结果表明该方法准确、简便可用于青蒿质量标准的控制。4青蒿药材中东莨菪碱、香豆素、木犀草素、槲皮素和山奈酚的HPLC同时测定采用SWELL ChromplusTM C18(250mm×4.6mm×5μm)色谱柱,甲醇-20mmol/L盐溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1;柱温25℃;检测波长254nm。在上述条件下,东莨菪碱、香豆素、木犀草素、槲皮素、山奈酚与杂质色谱峰分离良好。并进行方法学考察,回归方程为:东莨菪碱Y=6401.5X-14.902,(R2=0.9993),香豆素Y=3069X-13.953,(R2=0.9993),槲皮素Y=215941.9x-4.6159,(R2=0.9998),木犀草素Y=3949.2X+0.2978,(R2=0.9998),山奈酚Y=3345.5X-27.746,(R2=0.9998)。结果表明该方法准确、简便可用于青蒿质量标准的控制。5青蒿药材中水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的测定35个不同产地的青蒿样品的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量,水分含量在3.46%-11.15%之间,符合2010年版《中国药典》中规定过的低于14%;总灰分含量在1.54%-7.67%之间,符合2010年版《中国药典》中规定过的低于8.0%;酸不溶性灰分含量在0.26%-5.93%。浸出物含量在4.9%-7.65%之间,符合2010年版《中国药典》中规定过的不得少于1.9%。
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