【摘 要】
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目的:探究白术提取物白术内酯Ⅰ通过JAK2/STAT3细胞通路对IL-1β炎症因子诱导椎间盘髓核细胞退变模型的炎症反应和细胞凋亡影响。方法:外购人正常颈椎间盘髓核原代细胞,将原代细胞培养传代至6-7代时收集细胞悬液。将收集到的HNPCs用50ng/L浓度IL-1 β诱导HNPCs退变进行退变HNPCs模型造模。使用IL-1β诱导HNPCs细胞退变后收集细胞,分为HNPCs模型组和1.875umol
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目的:探究白术提取物白术内酯Ⅰ通过JAK2/STAT3细胞通路对IL-1β炎症因子诱导椎间盘髓核细胞退变模型的炎症反应和细胞凋亡影响。方法:外购人正常颈椎间盘髓核原代细胞,将原代细胞培养传代至6-7代时收集细胞悬液。将收集到的HNPCs用50ng/L浓度IL-1 β诱导HNPCs退变进行退变HNPCs模型造模。使用IL-1β诱导HNPCs细胞退变后收集细胞,分为HNPCs模型组和1.875umol/L、3.75umol/L、7.5umol/L、15umol/L、30umol/L、60umol/L 浓度白术内酯Ⅰ加药组。分别在干预24h、48h、72h时加入CCK-8细胞毒性试剂并测量每组的吸光度,然后对吸光度进行计算得出每组的细胞活力。使用IL-1β诱导HNPCs细胞退变后收集细胞,分为空白组,模型组,DMSO组,7.5umol/L和15umol/L浓度白术内酯I组加药组。用蛋白免疫印迹法（Western blot）法检测 JAK2/STAT3 通路中 JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、Aggrecan 和 Col2a1蛋白的表达情况。使用IL-1β诱导HNPCs细胞退变后收集细胞,分为空白组,模型组,DMSO组,7.5umol/L和15umol/L浓度白术内酯Ⅰ组。用流式细胞凋亡法双染色及单染色法检测各分组中HNPCs细胞的凋亡情况。结果:细胞毒性实验方面,干预时间为24h时,白术内酯Ⅰ浓度除60umol/L组的HNPCs细胞活力均大于模型组,其中15umol/L白术内酯Ⅰ浓度组和30umol/L白术内酯Ⅰ浓度组的细胞活力与模型组相比差异显著（P＜0.05）,其中1.875umol/L、3.75umol/L、7.5umol/L白术内酯Ⅰ浓度组的细胞活力与模型组相比无明显差异（P＞0.05）,白术内酯Ⅰ浓度为60umol/L分组细胞活力与模型组相比无明显差异;干预时长为48h时,白术内酯Ⅰ浓度为1.875umol/L组对退变HNPCs活力的影响与模型组相比无显著差异（P＞0.05）,其余白术内酯Ⅰ加药组则对退变HNPCs的细胞活力有明显升高（P＜0.05）;干预时间为72h时,所有白术内酯Ⅰ加药组的退变HNPCs的细胞活力与模型组相比均有显著提高,且每组与模型组相比均有显著差异（P＜0.05）。Western blot实验方面,白术内酯Ⅰ对JAK2/STAT3通路蛋白表达的影响:7.5umol/L白术内酯Ⅰ组和15umol/L白术内酯Ⅰ组的JAK2和STAT3蛋白表达均低于模型组,差异显著（P＜0.05）。提示白术内酯Ⅰ在7.5umol/L和15umol/L的浓度下,均对退变HNPCs的JAK2/STAT3通路炎症反应的发生以及炎症因子的分泌有明显的抑制作用;白术内酯Ⅰ对JAK2蛋白和STAT3蛋白磷酸化表达的影响:在白术内酯Ⅰ浓度为7.5umol/L时,p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达与模型组相比降低,但差异不明显（P＞0.05）;而在白术内酯Ⅰ浓度为15umol/L时,其p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平与模型组相比呈现明显降低,且差异显著（P＜0.05）;白术内酯Ⅰ对Aggrecan蛋白和Col2a1蛋白表达的影响:7.5umol/L的白术内酯Ⅰ浓度组Aggrecan和Col2a1的表达水平与模型组相比差异不明显（P＞0.05）;而浓度为15umol/L的白术内酯Ⅰ组中Aggrecan和Col2a1的蛋白表达水平与模型组相比明显下降（P＜0.05）。流式细胞凋亡方面,在晚期凋亡细胞方面,白术内酯Ⅰ加药组的细胞凋亡率略小于模型组,但差异不明显（P＞0.05）;在早期凋亡方面,白术内酯Ⅰ加药组的细胞凋亡率小于模型组,其中,7.5umol/L白术内酯Ⅰ浓度组与模型组相比差异不明显（P＞0.05）,15umol/L白术内酯Ⅰ浓度组与模型组相比有显著差异（P＜0.05）。结论:初步认为白术内酯Ⅰ在一定浓度下可以通过调控退变HNPCs的JAK2/STAT3通路的活化,进而对退变HNPCs的炎症反应和细胞凋亡产生一定的抑制作用,为“阳化气,阴成形”理论指导的从脾论治神经根型颈椎病提供客观依据,对进一步探索从脾论治神经根型颈椎病的作用机制有重要意义。
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