【摘 要】
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隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）是重要的人兽共患原虫。由此引起的隐孢子虫病可引起包括羔羊在内的幼龄家畜腹泻甚至死亡。肖氏隐孢子虫（Cryptosporidium xiaoi）是感染羔羊的主要虫种,然而其遗传特征尚不明确,原因是缺乏有效的亚型分型工具。本研究旨在了解隐孢子虫在我国中西部地区羊中的流行情况,并进一步建立肖氏隐孢子虫的亚型分型工具以解析其遗传特征。本研究分别采用基于S
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隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）是重要的人兽共患原虫。由此引起的隐孢子虫病可引起包括羔羊在内的幼龄家畜腹泻甚至死亡。肖氏隐孢子虫（Cryptosporidium xiaoi）是感染羔羊的主要虫种,然而其遗传特征尚不明确,原因是缺乏有效的亚型分型工具。本研究旨在了解隐孢子虫在我国中西部地区羊中的流行情况,并进一步建立肖氏隐孢子虫的亚型分型工具以解析其遗传特征。本研究分别采用基于SSU rRNA和gp60基因的巢式PCR结合测序的方法,对采自于安徽、河南和青海等地5个农场的646份绵羊粪便样品,以及安徽4个农场的402份山羊粪便样品进行隐孢子虫虫种和亚型鉴定。结果表明,在所有样品中隐孢子虫总体感染率为39.0%（409/1048）,其中山羊和绵羊的感染率分别为46.5%（187/402）和34.4%（222/646）,两者差异显著（P＜0.01）。不同地域结果对比发现,河南（55.4%,92/166）和安徽（66.9%,87/130）的隐孢子虫感染率均显著高于青海（12.3%,43/350,P＜0.01）。此外,不同的农场及年龄与羊群中隐孢子虫阳性率有关。在所有样品中共检测到包括肖氏隐孢子虫（n=396）、泛在隐孢子虫（n=12）和微小隐孢子虫（n=1）在内共3种隐孢子虫。进一步的亚型分型结果表明,泛在隐孢子虫均属于XIIa亚型家族,微小隐孢子虫为IId A19G1亚型。上述亚型均可感染人和其他多种宿主,提示羊中的隐孢子虫具有潜在的人兽共患风险。由于尚未获得肖氏隐孢子虫的全基因组序列,因此本研究基于与肖氏隐孢子虫遗传相近的牛隐孢子虫全基因组数据,通过序列同源比对获得gp60基因并设计巢式PCR引物,从而建立了肖氏隐孢子虫的亚型分型方法。采用该方法对本研究中的肖氏隐孢子虫进行亚型分型,共鉴定出6个亚型家族（XXIIa～XXIIf）。基于遗传进化分析证明,上述亚型家族不存在宿主适应性和地理隔离差异。部分肖氏隐孢子虫样品的PCR扩增结果呈现多个条带,表明在羊中可能存在肖氏隐孢子虫不同亚型的共感染。综上,本研究结果明确了隐孢子虫在我国中西部地区山羊和绵羊中的感染情况及流行特征,同时建立了肖氏隐孢子虫亚型分型工具,为肖氏隐孢子虫的遗传多样性研究奠定基础。
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