【摘 要】
：
目的:大鼠肝脏3α-HSD[EC1.1.1.50]具有二氢二醇脱氢酶活性,利用该酶可对血清中的总胆汁酸含量进行检测.为获得3α-HSD高表达工程菌株,也为开发3α-HSD的临床应用提供资料,该
论文部分内容阅读
目的:大鼠肝脏3α-HSD[EC1.1.1.50]具有二氢二醇脱氢酶活性,利用该酶可对血清中的总胆汁酸含量进行检测.为获得3α-HSD高表达工程菌株,也为开发3α-HSD的临床应用提供资料,该文对大鼠肝脏3α-HSD cDNA进行了克隆、表达及表达产物的纯化,并初步对纯化获得的重组3α-HSD的酶活性进行初步观察.结果与讨论:1、由于肝脏提取的总RNA有较好的完整性和较高的纯度,紫外分光光度法定量测得样品中RNA含量为2.88μg/μl.pGEM-T/33α-HSD序列分析发现克隆获得的3α-HSD与文献报道的仅一个碱基差别,在起始密码后的第814位T突变为C.2、不同诱导表达条件的探索表明,32℃、1mmol/L TPTG、4h为最佳条件,可获得高表达,表达的融合蛋白占菌体可溶性总蛋白的37.9﹪.SDS-PAGE检测融合蛋白分子量约为42KD,与融合蛋白pET-30a-c(+)/3α-HSD的预期分子量相吻合.重组融合蛋白主要以可溶形式存在于表达菌的胞质中,采用亲和层析法使融合蛋白的分离纯化的过程简单易行.3、通过3α-HSD活性检测pET-30a-c(+)/3α-HSD融合蛋白的活性,已初步检测到菌体总可溶性蛋白和纯化后的融合蛋白均具有3α-HSD催化活性.
羟类固醇脱氢酶;克隆;表达;活性检测
其他文献
该研究论文是从获得Balb/C小鼠金属硫蛋白-IcDNA开始.1、Balb/C小鼠金属硫蛋白-IcDNA的获得及其在质粒pUC19上的克隆;3、Balb/C小鼠金属硫蛋白-1融合蛋白的诱导表达及分离纯
锂离子电池因其具有能量密度高、输出电压高、循环性能好、使用寿命长、绿色环保等优良性质,近年来已广泛应用于便捷式电子产品、军事工业、航空航天等领域。目前,锂离子电池在电动汽车(EV)和混合电动汽车(HEV)的动力装置应用领域中也具有广阔的市场前景。然而,现阶段的锂离子电池的电化学性能、使用安全性等条件尚未达到市场需求；作为锂离子电池的重要组成部,负极材料的储锂性能、安全性等方面起着关键性的作用。Ni
目的 探讨16排螺旋CT常规剂量与低剂量胸部扫描诊断肺结核的临床效果.方法 60例肺结核患者,分别进行16排螺旋CT常规剂量和低剂量CT胸部扫描.比较两种剂量的诊断价值.结果 常
目的 建立肝毛细线虫感染的小鼠模型,为肝毛细线虫病的研究奠定基础. 方法 在洛阳鼠密度较高地区捕鼠,以人工消化法收集肝毛细线虫阳性鼠肝内的虫卵.将虫卵以不同密度(1 000
在磁微粒免疫分析中，免疫磁颗粒表面包覆的生物分子需要与溶液中的抗原/或抗体充分接触才能发生免疫反应。对生物分子的过度封闭与物理包裹会影响抗原抗体的免疫活性，降低分析
随着模式识别的发展，基于生物特征识别的身份认证系统正被人们重视。然而，传统的生物特征识别系统的识别率常受到环境以及生物学特征自身局限性的影响，由此引发了对多模态生物特
该文利用酸水解工艺对糖苷型大豆异黄酮进行水解得到游离型大豆异黄酮,而后以糖苷型与游离型大豆异黄酮为试验对象进行了以下试验:(1)对猪油油脂的自动氧化的抑制试验.(2)对
以小麦品系烟361、烟2801、烟103和小麦品种金铎032和92-8为材料进行外源基因的转化.所用的目的基于为牛酪蛋白基因(Casein),质粒载体为pAS12.1GUS基因和NPTII基因作为筛选标
碳酸酐酶（Carbonic Anhydrase, CA）是一类催化CO2和HCO3-之间相互转化的含锌金属酶，与光合作用密切相关。对油菜碳酸酐酶进行基因定位，对找到控制CA酶活基因和筛选具有高CA活性的
肠致病性大肠杆菌(EPEC),是一种通过粪-口途径传播的,能导致人类多系统感染的肠道致病菌,是引起发展中国家婴幼儿腹泻的主要原因之一.它的感染是由对靶细胞的粘附——激活靶