肌醇磷脂信号途径广泛参与生物体内多种细胞信号转导过程。动物方面的研究表明该信号途径在受精和早期胚胎发育过程中起重要作用。精卵融合活化磷脂酰肌醇特异的磷脂酶C(PLC)，作用于磷脂酰肌醇4,5二磷酸(PIP2)，使其水解产生二酯酰甘油(DG)和三磷酸肌醇(IP<,3>)，IP<,3>触发卵细胞胞内钙库钙释放产生钙波，从而使卵细胞激活。在哺乳动物的精、卵细胞中均发现特异表达的PLC异型体，这些PLC基因是完成受精和早期胚胎发育所必需的。 肌醇磷脂信号途径在植物方面的研究目前大多集中在植物对逆境信号反应方面。比如：植物对渗透胁迫、ABA、光、重力、病原侵染的反应均涉及肌醇磷腊信号系统，但PLC在植物有性生殖方面的研究还很少。本实验选用具有裸露胚囊的玄参科植物蓝猪耳为材料，克隆胚珠表达的PLC基因以探索PLC在植物有性生殖过程中的作用。 利用同源克隆的方法，应用RACE和RT-PCR技术，我们从蓝猪耳胚珠中克隆到2条磷脂酶C基因，分别命名为TfPLC1和TfPLC2。TfPLC1全长共2171bp，编码583个氨基酸，TfPLC2全长共2110bp，编码601个氨基酸。TfPLC1和TfPLC2都具有典型的EF手形区、X保守区、Y保守区和C2结构域。TfPLCl氨基酸序列与烟草PLC的同源性最高，为74％，而TfPLC2氨基酸序列则与马铃薯PLC1同源性最高，为63％。TfPLC1和TfPLC2之间氨基酸的同源性为56％。 Northern杂交结果显示，TfPLC1在胚珠中优势表达。我们克隆了蓝猪耳TfPLC1长约为1.3 kb的启动子，TfeLC1 Promoter：GUS转化蓝猪耳实验表明，TfPLC1主要在胚珠、柱头、以及成熟的花粉中表达。而且随着柱头发育时期不同，GUS表达活性也不同，在开花后两天柱头张开时期，表达量最高。以TfPLC1特异区段原核表达融合蛋白，用纯化后约1.7kD的融合蛋白免疫兔子，获得了特异识别TfPLC1蛋白的抗体。利用纯化的抗体进行免疫杂交，结果发现TfPLC1主要在柱头授粉面的乳突细胞基部中表达，而在柱头的背面细胞表达量相对较低。推测TfPLC1可能参与了胚珠发育以及授粉受精的过程。为了研究TfPLC1的功能，我们利用TfPLC1的特异区段构建了RNAi表达载体，得到了转基因植株，为研究TfPLC1在蓝猪耳胚珠发育以及受精过程中的功能奠定了基础。 Northern杂交结果显示，TfPLC2主要在营养器官表达，如叶、茎和根，而在生殖器官中表达量较低。TfPLC2受盐等逆境胁迫以及ABA的强烈诱导。利用TfPLC2的特异区构建了RNAi表达载体，得到了转基因植株。半定量PCR结果表明，转基因植株中TfPLC2mRNA表达量降低。在干旱条件下，T0代离体叶片失水率比野生型高。在盐胁迫的情况下，T1代幼苗与野生型相比叶片边缘出现较大面积的白斑，证明TfPLC2可能以依赖于ABA的方式参与逆境胁迫下的信号转导。