【摘 要】
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干扰素系统在所有脊椎动物非特异性免疫系统中都扮演着举足轻重的作用。虽然研究表明鱼类具有与哺乳类相似的
干扰素系统,但对其具体信号转导路径和分子机理的研究还远
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干扰素系统在所有脊椎动物非特异性免疫系统中都扮演着举足轻重的作用。虽然研究表明鱼类具有与哺乳类相似的
干扰素系统,但对其具体信号转导路径和分子机理的研究还远不如哺乳类深入。为进一步了解鱼类干扰素系统的分子机制,本文克隆了草鱼干扰素(CiIFN)和干扰素调节因子1、7(CiIRF1/7)的基因组序列,进行序列比对和进化树分析,搜索启动子数据库对启动子序列进行潜在转录因子结合位点预测。组织表达分析表明CiIFN和CiIRF7均受Poly(I:C)诱导。分别原核表达并纯化了CiIRF7的DNA结合结构域(DBD)、非DNA结合结构域(nDBD)和完整的开放阅读框(ORF),并克隆了CiIFN启动子序列的8个不同片段,通过凝胶阻滞分析(EMSA)表明CiIRF7的DBD结构域能够与CiIFN启动子序列结合,揭示了其可能为调控CiIFN转录的转录因子。同时,本文还鉴定了受干扰素诱导水平较高的两个ISG基因:CiIFI58和CiGig1。组织表达分析表明两者在多个组织都有本底表达,且受Poly(I:C)上调。此外,还构建了真核表达载体pcDNA3.1-CiIRF1/3/7和荧光素酶报告基因重组载体pGL3-basic/CiIFNP1-8,为下一步研究体内CiIRF1/3/7对CiIFN的诱导效应做好准备。
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