【摘 要】
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瓦氏秋海棠（Begonia wallichiana L.）为秋海棠科秋海棠属多年生草本植物,植株体量较大,茎秆粗壮,花色洁白,具有木本植物的部分性状,且花果量大、生命力强、再生速度快,是进行遗传转化研究的优良观赏植物材料;本属有许多栽培秋海棠为著名观赏植物,深受人们喜爱,为更好地对本物种进行遗传转化研究,同时也为本属及其他观赏植物遗传转化技术改良提供新的参考,本研究主要以瓦氏秋海棠为实验材料,探讨
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瓦氏秋海棠（Begonia wallichiana L.）为秋海棠科秋海棠属多年生草本植物,植株体量较大,茎秆粗壮,花色洁白,具有木本植物的部分性状,且花果量大、生命力强、再生速度快,是进行遗传转化研究的优良观赏植物材料;本属有许多栽培秋海棠为著名观赏植物,深受人们喜爱,为更好地对本物种进行遗传转化研究,同时也为本属及其他观赏植物遗传转化技术改良提供新的参考,本研究主要以瓦氏秋海棠为实验材料,探讨了适合瓦氏秋海棠离体高效再生及遗传转化的技术体系,并对Hyg抗性材料进行了分子生物学鉴定,结果如下:1、瓦氏秋海棠种子无菌萌发技术的研究。以瓦氏秋海棠种子为供试材料,探讨了消毒方法、春化时间、基本培养基对其无菌萌发的影响。结果表明,使用0.1%高锰酸钾消毒1 min后、再用10%次氯酸钠溶液消毒10 min,既能消毒干净,又能获得较高的发芽率;不进行春化的种子难以发芽及生长,10 d是种子萌发及健康生长的合适春化时间;MS培养基较适合种子发芽。2、瓦氏秋海棠高效离体再生体系的研究。以瓦氏秋海棠无菌苗叶片为外植体,以MS、1/2MS为基本培养基,分别添加0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L的6-BA,0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/L 的 NAA,0、0.1、0.2 mg/L 的 2,4-D,以探究其高效再生体系。结果表明,合适的基本培养为MS培养基,合适的激素组合为1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/LNAA,在该组合下一个月内即可大量形成不定芽,不定芽生根率达100%。3、瓦氏秋海棠叶盘法遗传转化体系的研究。以瓦氏秋海棠无菌苗叶片为外植体,分别探究了抑菌剂（Cef）浓度、筛选剂（Hyg）浓度、侵染时间及方式、菌液浓度、共培养时间、恢复培养和筛选培养方法、恢复培养后梯度筛选方法对遗传转化体系的影响。结果表明,根据外植体的自身情况,Cef的抑菌适宜浓度在100-300 mg/L、Hyg的最低筛选浓度为5 mg/L,侵染1-2 h同时摇晃菌液、共培养2d、恢复培养后梯度筛选是适合瓦氏秋海棠的遗传转化体系。4、瓦氏秋海棠转基因抗性植株的鉴定。利用上述遗传转化体系进行转GFP基因试验,经恢复培养及筛选培养得到转化材料,针对GFP基因与农杆菌质粒进行双重PCR检测。结果表明,恢复培养前的农杆菌附着率为100%;恢复培养后,农杆菌的侵染成功率为87.5%,其中约有12.5%的再生植株已确定导入了 GFP基因;初步筛选后,抗性植株的获得率为40-60%,其中导入GFP基因的外植体比例约为10%;经三次筛选后,最终抗性再生植株的获得率为50%,抽样鉴定结果显示遗传转化效率约为16.7%。荧光显微镜检测显示,GFP基因在抗性再生植株内表达后呈星点状分散分布,且主要分布在主叶脉附近。
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