多羟基双萘醛提取物对猕猴桃溃疡病的防治作用及机理研究

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猕猴桃溃疡病是猕猴桃生产中的一种毁灭性病害,引起主杆和枝条溃疡腐烂,不仅严重影响猕猴桃植株的产量,而且降低果实品质;在我国已造成毁林毁园等严重后果,现已被列入中国森林植物检疫对象。本研究针对猕猴桃溃疡病菌,利用多羟基双萘醛提取物(WCT),通过室内测定抑菌效果,大田防效和施药后引起的寄主植物蛋白表达,得到WCT对猕猴桃溃疡病有很好的防治作用。研究结果如下:多羟基双萘醛提取物(WCT)是本实验室筛选出来的一种抑菌活性物质。利用WCT对猕猴桃溃疡病菌进行室内毒力测定。WCT稀释10倍的效果最佳,抑菌圈直径为2.40cm,EC50为11.5,,抑制率为57.9%,高于菌毒清的处理。WCT原液稀释成浓度为100 mg/ml、50 mg/ml、25 mg/ml、12.5 mg/ml、6.25 mg/ml、3.125 mg/ml,6种浓度测定WCT对猕猴桃溃疡病菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。MIC和MBC分别为25 mg/ml,50 mg/ml。结果表明,随着WCT浓度增加,其抑菌作用越明显。在田间WCT对猕猴桃溃疡病的相对防效为69.3%,伤口平均愈合率为45.68%,高于菌毒清的防治效果34.325%。涂药处理后第1、2、4、7天,测定猕猴桃叶片多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)活性,结果发现,WCT预防处理在涂药后第4天或第7天相对于发病对照显著提高PPO和POD的活性,且两种酶活性随时间的推移都有一个比较稳定的变化趋势。WCT治疗处理酶活性变化规律与发病对照相近,对寄主植物没有诱导作用。涂药处理后采用聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳分析猕猴桃病程相关蛋白,结果发现,涂抹WCT和接种病原菌都能诱导出一条相对分子量为35.234kD的碱溶性蛋白,经过分析蛋白是猕猴桃水果蛋白,并且其表达量从第1天到第7天都有明显的增加,而在未处理也未接菌是不表达或表达量较低。WCT诱导的病程相关蛋白经过透析纯化后显示为单一条带,纯化的蛋白进行皿内抑菌试验,结果表明对猕猴桃溃疡病菌有明显的抑制作用,浓度在400μg/ml时抑制率最高为52.43%。
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