谷子纹枯病和茎基腐病病原菌的分离鉴定与特性研究

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谷子是我国北方重要的杂粮作物,种植面积占世界的80%,但是随着谷子单一化、同质化种植和推广面积的不断扩大,谷子病害发生日趋严重,对谷子产量和品质造成了双重威胁。探明引起谷子病害的病原以及明确病原物的生物学和生理生化特性等是制定有效防治措施的重要前提。本研究以谷子纹枯病和新发现的谷子茎基腐病病株为研究材料,利用柯赫氏验证、致病性测定、形态学和分子生物学鉴定等方法分别对两种病原菌进行分离、纯化和鉴定。通过设置不同温度、光照、p H、碳源、氮源等条件培养纹枯病菌,观察记录菌落及菌核形成情况,拟明确谷子纹枯病菌的生物学特性;另外,将谷子纹枯病菌接种小麦、玉米和水稻等植物,探究其对其它禾本科寄主植物的致病性。此外,对谷子茎基腐病菌进行生理生化特性研究和碳源利用情况测定。试验结果可为谷子病害的研究和防治提供理论基础。主要研究结果如下:1.首先,对采自田间的谷子纹枯病病样进行病原菌分离纯化,根据菌落、菌核培养形态及利用核糖体基因内转录间隔区(r DNA-ITS)序列进行同源性比对分析,最终将该病原菌确定为丝核菌属立枯丝核菌Rhizoctonia solani AG-4。2.其次,通过测定谷子纹枯病菌在不同培养条件下的生长状况,初步明确了在PDA培养基上,该病菌在10~35℃的条件下均可生长,最适温度为25~30℃;p H 4~10时菌落均可生长并形成菌核,最适p H为6;黑暗条件有利于菌丝的生长,光照条件有利于菌核的形成。纹枯病菌对供试的碳源和氮源都能很好地利用,其中蔗糖和硝酸钾分别为最合适的碳源和氮源;在察氏培养基上菌丝生长最快。PDA和PSA培养基最有利于菌核的形成;WA培养基上菌丝产生量最少且不形成菌核。对其它寄主接种结果显示:谷子纹枯病菌对水稻、小麦、高粱都具有良好的致病性。3.本研究对谷子新病害茎基腐病进行病原菌分离培养和鉴定,通过对菌株进行生理生化分析、电镜观察、致病性测定、Biolog GenⅢ测定及16S r DNA和rpo B序列分析,首次明确了该病害是国内外未见报道的由肠杆菌引起的谷子茎基部腐烂的新病害,病原为肠杆菌属Kosakonia cowanii。4.谷子茎基腐病病原菌生理生化测定结果表明,该病原菌是革兰氏阴性菌、兼性厌氧、能运动、硝酸还原反应结果为阳性、不能水解淀粉、含过氧化氢酶,甲基红反应为阴性;Biolog GenⅢ测试结果表明,在23种化学敏感性测试中除了二甲胺四环素和溴酸钠外,其余包括乳酸钠在内的21种敏感性测试结果均为阳性;在71种碳源利用中,该病原菌可以利用蔗糖、D-麦芽糖、α-D-乳糖、D-半乳糖、D-山梨醇、D-甘露醇、甘油、肌醇等50种碳源。综上,本研究明确了谷子纹枯病和谷子茎基腐病的病原类型,探明了谷子纹枯病菌的生物学特性和茎基腐病菌的生理生化特性以及碳源利用情况,该研究结果可为今后谷子这两种病害发生发展规律的研究以及病害防治提供研究基础和前提。
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