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目的:评价兔膝关节内侧半月板损伤制作骨关节炎模型方法的可行性,探讨白介素-1beta(IL-1β)和金属蛋白酶-13(MMP-13)在兔骨关节炎模型软骨和滑液中的作用机制。
方法
1新西兰大白兔40只,月龄4-6月,重量1.8-2.5kg。雌雄不限,由新乡医学院实验动物中心提供,随机分为实验组和对照组,实验组30只,对照组10只。以右侧后膝关节作为手术侧。实验组在内侧半月板游离缘体部与后角交界处造成0.7×0.3cm全层裂伤的无血运区损伤,对照组仅打开关节腔;实验组于术后2、6、12周各处死10只。对照组术后12周处死。
2观察实验组2周、6周、12周及对照组12周动物的股骨髁关节软骨的病理变化,并根据Pelletier JP方法行股骨髁关节软骨病变评分;HE染色;用免疫组化方法检测IL-1β和MMP-13的表达情况;用病理图像分析系统,计算各组软骨细胞中IL-1β和MMP-13表达的细胞分数。分别抽取实验组2周、6周、12周及对照组12周动物关节腔内滑液后,用酶联免疫吸附法测定关节液中IL-1β和MMP-13的含量。采用SPSS17.0统计学软件进行统计学分析。
结果
1实验2周时大体观察和病理观察即可见软骨退变;6周和12周时退变进一步加重,对照组未见明显软骨退变,不同时间点关节软骨评分有统计学差异。
2 HE染色:对照组关节软骨细胞排列规则,分层明显、均匀,未见空泡细胞;实验组2周时软骨细胞水肿;实验组6周时软骨细胞分层混乱,细胞肿胀;实验组12周时软骨细胞稀疏,部分软骨细胞簇集、水肿,且可见大量空泡细胞。
3免疫组织化学:(1)IL-1β在两组中均有表达,实验组2周细胞分数比对照组稍高,无统计学意义(P>0.05);实验组6、12周细胞分数比对照组细胞分数明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);实验组6、12周细胞分数比实验组2周细胞分数明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);实验组12周细胞分数比实验组6周细胞分数明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)MMP-13在对照组关节软骨细胞中未见表达,实验组的关节软骨细胞中可见MMP-13蛋白的表达,实验组6周细胞分数比实验组2周细胞分数明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);实验组12周细胞分数比实验组6周细胞分数明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);实验组12周细胞分数比实验组2周细胞分数高,差异有统计学意义(P<0.05)。
4.ELISA:实验组第2周关节滑液中IL-1β水平较对照组稍高,差异无统计学意义(P>0.05);实验组第6、12周关节滑液中IL-1β水平较对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);关节滑液中MMP-13的检出率在对照组为0%,而在实验组也仅有18%。
结论:1采用损伤兔膝关节半月板的方法可建立动物OA模型。
2 IL-1β和MMP-13在OA发病过程中起重要用,IL-1β和MMP-13的表达可以作为骨性关节炎早期诊断的参考指标。