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目的:卵巢癌是目前临床上女性生殖系统中恶性肿瘤最常见的死亡原因之一,5年生存率低。肿瘤微环境在肿瘤的发生发展中发挥着不可或缺的作用,其中肿瘤相关巨噬细胞具有肿瘤支持特性。我们旨在通过纳米载药递送系统,制备载micro RNA-34a（miR-34a）纳米微球,并探究其稳定性和对卵巢癌及其卵巢癌中肿瘤相关巨噬细胞的作用机制,为卵巢癌的选择性免疫治疗提供新的视角。方法:采用化学方法合成脂质体修饰的磁性四氧化三铁微球（CLs@Fe3O4）,利用紫外分光光度计、傅里叶变换红外光谱仪等技术表征,琼脂糖凝胶实验探寻miR-34a与CLs@Fe3O4的最佳结合比例。利用荧光显微镜观察人卵巢癌SKOV3、A2780细胞对载miR-34a的CLs@Fe3O4的摄取,RT-q PCR确定CLs@Fe3O4的转染效率,从而定量分析miR-34a在不同卵巢癌细胞以及人正常卵巢上皮细胞ISOE-80中的表达水平;应用CCK-8试剂盒检测空载磁性纳米微球对卵巢癌细胞的毒性。将卵巢癌细胞过表达miR-34a,通过CCK-8、平板克隆形成试验检测对卵巢癌细胞增殖能力的影响,细胞划痕、Transwell实验检测对卵巢癌细胞迁移、侵袭能力的作用,流式细胞仪检测卵巢癌细胞凋亡的变化。CCK-8法检测顺铂的毒性,以及与miR-34a联合用药对卵巢癌细胞存活性的影响。建立人THP-1单核细胞分化成为巨噬细胞M1、M2亚型的模型;采用q RT-PCR的方法检测巨噬细胞及其亚型标记物和miR-34a的表达;荧光摄取实验和转染效率实验验证miR-34a转入细胞中;将转染miR-34a的M2型巨噬细胞与卵巢癌细胞共培养后,再次借助CCK-8、平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell实验、流式凋亡检测确定对卵巢癌细胞生物学功能的影响。于M2型巨噬细胞中,过表达miR-34a,检测M2型分子标记物以及miR-34a的表达水平;在SKOV3、M2型巨噬细胞中转染miR-34a,PCR分别检测CCL5、NF-κB水平;CCL5刺激因子刺激巨噬细胞,或转染si RNA CCR1、si RNA CCR5后CCL5刺激,Western blot检测巨噬细胞中NF-κB、p-NF-κB水平。结果:1.载miR-34a的纳米载药递送系统的构建及表征成功制备了脂质体修饰的磁性四氧化三铁微球,CLs@Fe3O4平均粒径为305.50nm,平均zeta电位为+23.33m V,miR-34a与CLs@Fe3O4结合的最佳质量比为1:3。2.载miR-34a的纳米载药递送系统体外抗卵巢癌作用miR-34a在人体卵巢癌中的含量极低,而在正常卵巢上皮组织中则有很高的表达能力。在转染miR-34a的卵巢癌细胞中,通过荧光摄取实验和转染效率实验,确定了CLs@Fe3O4作为纳米载体,相比游离药物,能很好地将miR-34a带入细胞。CCK-8结果显示空载CLs@Fe3O4对人卵巢癌SKOV3、A2780细胞均有一定的毒性作用,且表现为浓度依赖性和时间依赖性,因此,选定CLs@Fe3O4浓度为4μg/ml以排除材料对卵巢癌细胞的影响。CCK-8实验表明miR-34a对卵巢癌细胞增殖的影响无明显变化,而在平板克隆形成实验中,卵巢癌细胞的增殖能力受到明显抑制。细胞划痕实验和Transwell实验证明miR-34a可以抑制卵巢癌细胞在迁移和侵袭方面的能力。流式细胞仪检测miR-34a促进了卵巢癌细胞的凋亡,在SKOV3细胞中主要发生晚期凋亡,而在A2780细胞中凋亡主要发生在早期。3.载miR-34a的纳米载药递送系统通过增加顺铂敏感性体外抗卵巢癌作用在选择合适的DDP浓度单独或与miR-34a联合应用时,通过增加顺铂（DDP）使用CCK-8法进一步确定miR-34a是否影响卵巢癌细胞的增殖能力,顺铂对卵巢癌的毒性随浓度和时间的增加而增加,并具有浓度依赖性和时间依赖性。两者的联合应用,更有力地抑制了卵巢癌细胞的增殖能力,间接证明了miR-34a的作用。4.载miR-34a的纳米载药递送系统通过调节TAM表型抑制卵巢癌进展在卵巢癌肿瘤微环境的探究中,人单核细胞THP-1可以在不同的刺激因素诱导下分化为不同的巨噬细胞亚型,在M2型巨噬细胞中,CD163、CD206表达水平高,在M1型巨噬细胞中,CD80的表达更多,miR-34a在M1的表达量较M2高,CLs@Fe3O4同样可以作为载体将miR-34a带入巨噬细胞中,且转染效率很高。将转染后的巨噬细胞与卵巢癌细胞共培养,CCK-8法对卵巢癌细胞的存活率依然没有意义,但在平板克隆形成实验中,抑制增殖能力的作用是显著的;细胞划痕和Transwell实验分别从横向迁移、纵向迁移和侵袭力三个方面证实了miR-34a通过影响肿瘤相关巨噬细胞从而抑制卵巢癌的迁移和侵袭;流式细胞仪检测表明,共育后的miR-34a不会明显影响卵巢癌细胞的凋亡;因此miR-34a主要通过调节肿瘤相关巨噬细胞抑制卵巢癌的迁移和侵袭。5.载miR-34a的纳米载药递送系统通过靶向CCL5/NF-κB调节TAM表型抑制卵巢癌进展在转染miR-34a的M2型巨噬细胞中,miR-34a的表达增加,CD163和CD206的表达水平降低,说明miR-34a的过度表达可以促使M2型巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞。分别在转染miR-34a的人SKOV3细胞、M2型巨噬细胞中检测CCL5、NF-κB的水平,SKOV3中CCL5水平升高,M2中NF-κB水平也随之升高;在用CCL5刺激因子直接刺激M0巨噬细胞一定时间后,NF-κB和p-NF-κB表达水平均增加,而将CCR1、CCR5沉默,CCL5刺激后NF-κB和p-NF-κB表达水平较低,尤以si CCR5最明显,因此,miR-34a通过CCL5-CCR1或CCL5-CCR5激活细胞内NF-κB信号通路促进巨噬细胞中M1极化的增加、M2极化的减少。结论:经脂质体修饰而成的磁性四氧化三铁微球作为载体,具有良好的递送性;miR-34a在人卵巢癌细胞中低表达,增加miR-34a表达可以抑制卵巢癌的增殖、迁移和侵袭,促使细胞凋亡,发挥抗癌功效;miR-34a还能协同顺铂抑制卵巢癌增殖;miR-34a可以通过调节肿瘤相关巨噬细胞表型抑制卵巢癌的迁移和侵袭能力,对增殖和凋亡的影响较小;miR-34a可以通过靶向调控CCL5/NF-κB通路促进肿瘤相关巨噬细胞（TAM）表型转化。这些结果最终表明,miR-34a可以通过靶向CCL5,激活巨噬细胞中的NF-κB信号通路,直接或间接调控卵巢癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞表型的变化显著抑制卵巢癌的进展,从而为卵巢癌的免疫治疗提供了新的思路。