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目的
测定肺癌病人放化综合治疗前后及正常对照组的血清蛋白质谱,筛选差异蛋白,建立诊断模型。观察治疗前后血清蛋白质组变化及测定人肺腺癌细胞放射前后的差异蛋白质,探讨蛋白质指纹图谱在肺癌研究中的作用和意义。
方法
1、应用SELDI-TOF-MS及CM-10芯片对35例健康对照组、43例肺癌病人(非细胞肺癌35例)进行蛋白质指纹图谱测定,并观察放化综合治疗前后蛋白质谱变化。应用BioMarker Wizard 3.01及BioMarker Parrem System5.01分析软件对测得的数据进行处理并建立诊断模型。2、用双向凝胶电泳对人肺腺癌细胞系A549细胞放射前后的蛋白质谱进行分析,寻找差异蛋白,并用MALDI-TOF-MS进行蛋白质鉴定。
结果
1、肺癌组与健康对照组血清蛋白质谱测定,共检测到251个蛋白质峰,筛选出差异蛋白质峰11个,以质荷比(m/z)分别为M2799 26,M3227 41,M5739_70和M8164_30的4个蛋白质峰为依据组合构建分类决策树模型I,其原始判别总准确率为91.0%(71/78),敏感性为88.4%(38/43),特异性为94.3%(33/35):交叉验证总准确率为85.9%(67/78),敏感性为88.4%(38/43),特异性为82.9%(29/35)。肺癌组治疗前后蛋白质谱进行对比分析,发现有23个蛋白质峰发生了显著性的变化(P<0.05),其中治疗后表达降低的有20个,表达升高的有3个蛋白质峰。其中包括肺癌组差异表达的三个蛋白质峰(m/z 2572 06、2885-81、5739-71)。2、非小细胞肺癌组与健康对照组血清蛋白质谱测定,筛选出差异蛋白质峰16个,其中非细胞肺癌组8个蛋白质峰表达升高,8个蛋白质峰表达降低。以质荷比(m/z)为2572 06、2885 81、3870 42、4161 37、5739 70和8164_30的6个蛋白质峰以其为依据组合构建分类决策树模型Ⅱ,原始判别总准确率为87.1%(61/70),敏感性为91.4%(32/35),特异性为82.9%(29/35);交叉验证总准确率为75.7%(53/70),敏感性为80.0%(28/35),特异性为71.4%(25/35)。观察此16个差异蛋白质峰的表达在放化治疗前后的变化,显示均发生了不同程度的变化,趋向健康对照组,其中质荷比为2572_06、2885_81、4664_78、9228 39和9396 42的5个蛋白质峰在治疗前后发生了显著性的变化。3、人肺癌细胞系A549细胞放射前后蛋白质谱用双向凝胶电泳进行测定及分析,检测出25个差异蛋白质,对其中差异2倍以上的7个蛋白质点用MALDI-TOF-MS鉴定,鉴定出Manganese superoxide dismutase isoform B precursor、keratin 8、keratin 9、dystrobrevin、HNRPHl、enolase l等6种蛋白质。
结论
SELDI-TOF-MS技术对肺癌差异蛋白的筛选及治疗疗效的判定可能有一定的意义,需要扩大样本量及样品纯化、分级提取血清蛋白质等方法进一步研究证明;用双向凝胶电泳筛选细胞系放射前后差异蛋白质,筛选的蛋白质与抗氧化、辐射防护、信号传导、RNA加工和转运、能量代谢及细胞凋亡有关,对于揭示放射治疗的分子机制有一定的意义;SELDI-TOF-MS技术对低分子量低丰度蛋白质的筛选有很大优势,并可以建立诊断模型。而双向凝胶电泳及MALDI-TOF-MS技术适用于高分子量蛋白质的筛选。