江苏省不同地区淡色库蚊的遗传多样性分析

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[目的]应用扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)技术对江苏省不同地区淡色库蚊的遗传多样性及遗传变异进行分析,计算样品间的遗传相似性指数和遗传距离,并构建UPGMA(非加权分组平均法)系统发生树。[方法]从江苏省收集了8个地区的淡色库蚊,分别来自常熟、张家港、盐城、无锡、徐州、南京、南通、昆山,还收集了南京医科大学病原生物学实验室饲养的典型淡色库蚊;用QIAGEN DNeasy Kit试剂盒分别提取蚊基因组DNA,通过COI基因扩增、多重PCR扩增ITS基因和ITS的克隆测序进行模板的验证,然后进行AFLP的分析,即通过酶切与连接、预扩增、选择性扩增,再经毛细管电泳筛选出分辨率高的电泳图;将电泳图上出现的条带标记为1,没有条带的标记为0,建立0,1矩阵,将结果输入NTSYS2.10软件上计算Nei-Li相似性系数,遗传距离(GD)用公式计算:GD=1-2Nab/(Na+Nb),采用UPGMA(unweighted pair-group method with arithmetic means,非加权分组平均法)进行聚类分析。[结果]从80对引物组合中筛选出10对引物组合,这10对引物组合在9个样本中共扩增到262个位点,大小位于100-1500bp,多态性位点185个,多态性比率(PP)达70.6%,每对引物扩增到的多态性位点在14-30个之间,平均18.5个。引物组合E2M7扩增的多态性最高,多态性比例为87.5%,引物组合E4M7扩增的多态性最低,多态性比例为48.3%,10对引物中昆山地区扩增的位点最多(176个),南通地区扩增的位点最少(48个);利用NTSYS2.10软件计算表明,昆山与张家港间的遗传相似性指数最大(0.8478),遗传距离最小(0.1522),无锡和徐州间的遗传相似性指数最小(0.2139),遗传距离最大(0.7861)。基于Nei遗传距离构建的UPGMA系统发生树表明,以相似性系数0.64为域值,9个地区的淡色库蚊聚成三支,其中南医大、盐城、徐州聚成一支;常熟、张家港、昆山聚成一支;无锡、南通、南京聚成一支。[结论]江苏省不同地区的淡色库蚊存在显著的遗传多样性和遗传差异,且表明AFLP技术具有极好的分辨率,可以有效地进行淡色库蚊遗传多样性的分析。
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