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目的:卵巢癌是全球致死率最高的妇科恶性肿瘤,且发病率高居妇科恶性肿瘤第三位。卵巢癌由于解剖位置特殊,位于盆腔深处,早期无明显的特异性症状,大部分患者在晚期才被确诊,并已发生广泛的盆腹腔转移,加之术后化疗耐药的存在,导致进展期卵巢癌患者的预后极差,5年生存率徘徊在40%左右。与其他恶性肿瘤的转移方式不同,卵巢癌不仅可以通过直接侵袭转移至邻近器官,还可通过播散种植发生盆腹腔转移,仅靠手术难以完全切除肿瘤。大多数卵巢癌患者复发的部位都是腹腔转移复发,患者多死于肠梗阻和恶液质。因此,深入研究卵巢癌腹腔转移的调控机制,有助于明确转移调控的关键通路和分子,从而发现卵巢癌转移的新的肿瘤标志物以及治疗靶点,对提高卵巢癌的诊治水平、改善患者预后具有重要意义。高级别浆液性卵巢癌(high grade serous ovarian cancer,HGSOC)作为卵巢癌中的一种特殊病理类型,与其它病理类型的卵巢癌相比,侵袭性更高,患者预后更差,因此,深入研究HGSOC腹腔转移机制更为迫切和重要。人类基因组测序工程显示仅有2%的DNA可以编码大约20000种蛋白编码基因,剩下超过90%的DNA不编码蛋白,其转录产物即非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)。作为非编码RNA中的特殊成员,环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类天然存在的由反向剪接(back-splicing)过程产生的共价闭合环状RNA,具有在真核细胞中广泛存在,进化上保守,在组织中表达特异且高度稳定等特点,与多种肿瘤的发生发展密切相关。已有文献证实环状RNA参与多种肿瘤的发生,侵袭,转移过程,并与肿瘤的分期、预后等因素有关。CDR1as作为一个经典的环状RNA,是CDR1基因外显子反向剪接环化形成,长度1485nt,含有70多个mir-7的结合位点,可以通过竞争性结合mir-7从而影响其下游靶基因的活性。已有研究表明CDR1as与肺癌,胃癌,结直肠癌等多种肿瘤的发生发展相关,可能为肿瘤的诊断提供新的标志物与治疗靶点。本研究首先通过生物信息学分析方法探讨了CDR1as在卵巢癌患者组织中的表达情况以及与生存之间的关系,之后从临床上选取HGSOC患者术后组织,检测CDR1as在HGSOC不同期别原发灶以及大网膜转移灶中的表达情况并探讨其与卵巢癌临床病理特征的关系,最后通过transwell实验探讨CDR1as对卵巢癌细胞侵袭迁移能力的影响。希望通过这些研究结果进一步明确CDR1as与卵巢癌发生发展与侵袭转移进程的关系。研究方法:利用GEPIA等数据库查找CDR1as的基本信息,分析CDR1as在卵巢癌中的表达及对卵巢癌患者生存率的影响。收集2016至2018年于中国医科大学附属盛京医院进行卵巢癌根治术的67例患者组织,其中50例患者于III IV期,同时取到了其中47例患者的原发组织及对应的网膜转移组织,17例患者于I II期,仅取卵巢癌组织。所有的组织标本在获取后,立即放入液氮中,随后被放入-80℃冰箱中长期保存。Circbase数据库查找环状RNA序列,并利用primer 5软件针对CDR1as反向剪接位置设计特异性PCR引物。通过琼脂糖凝胶电泳实验及公司测序,验证引物的正确性。应用Real-time PCR技术检测CDR1as在卵巢癌组织与对应的大网转移组织中的表达。采用非参数检验中的Mann-Whitney U检验来分析CDR1as表达水平与卵巢癌患者临床病理特征的相关性。构建PcDNA3.1-CDR1as质粒及PcDNA3.1-NC质粒,转染卵巢癌细胞系SKOV3及OVCAR3,构建瞬时过表达CDR1as细胞系。构建sh-CDR1as质粒及shNC质粒,转染卵巢癌细胞系SKOV3及OVCAR3,构建瞬时敲除CDR1as细胞系。应用transwell实验分别检测CDR1as过表达细胞、CDR1as敲除细胞及相应NC细胞的迁移及侵袭能力。与NC组细胞相比,观察并分析CDR1as对细胞侵袭能力的影响。结果:1.GEPIA数据库中预测CDR1as在426例卵巢癌组织中的表达明显高于88例正常组织中的表达(P<0.01)。无病生存分析中HR=1.3,P<0.05,说明CDR1as对于卵巢癌患者的无病生存是一个危险因素,但CDR1as对于卵巢癌患者的总生存率无明显影响。2.在47例配对的HGSOC患者中及20例不配对的HGSOC原发组织中验证CDR1as的表达情况,发现在67例卵巢癌原发灶中50例III、IV期患者卵巢癌组织中CDR1as的表达高于17例I、II期患者组织(P<0.05),且与卵巢癌原发组织相比,CDR1as在47例大网转移组织中表达显著升高(P<0.001)。3.临床病理分析结果显示:CDR1as在高级别浆液性卵巢癌患者原发组织中的表达水平与FIGO分期有关(P=0.038),与患者的年龄,淋巴结转移,CA125水平及腹水量无统计学意义(P>0.05)。4.利用transwell实验检测发现,与NC对照组相比,过表达CDR1as组的卵巢癌细胞系侵袭及迁移能力明显增强。在OVCAR3及SKOV3细胞系中敲除CDR1as,与sh-NC组相比,敲除CDR1as组的细胞系侵袭及迁移能力明显减弱。结论:CDR1as在HGSOC患者原发灶中的表达水平与FIGO分期相关,随着期别的增加,CDR1as的表达升高。CDR1as在HGSOC腹腔转移灶中的表达明显高于原发灶。CDR1as促进卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。