牛磺胆酸(Taurocholate Acid,TCA)是结合型胆汁酸的一种,广泛存在于羊胆汁中,是羊胆汁中的主要成分之一,具有很高的药用价值,目前其提取纯化工艺不够完善。本研究旨在小试试验的基础上,建立从羊胆汁中提取纯化TCA的中试工艺技术路线。提取工艺内容如下:羊胆汁→除蛋白→去色素→去脂→浓缩回收乙醇→盐析→萃取→硅胶层析。结果:每2L羊胆汁中TCA的提取量为13.95±0.67g,纯度为96.52±5.278;回收率为71.25%土7.62%。建立了 TCA的LC-MS/MS检测方法,色谱条件:采用Poroshell 120 EC-C18(3.0 mm×100 mm,2.7 μm)色谱柱;柱温:42℃;进样量:1 μL;流速:0.5 mL.min-1;以色谱级甲醇溶液为流动相。质谱条件:离子源:电喷雾离子源(ESl);质谱扫描方式:多反应监测模式(MRM),负离子化模式(Negtive)检测;雾化气压力4,500V;辅助加热气压力3,500V(-);扫描范围(10-1000);干燥气体氮气;干燥气流量12 L·min-1;干燥气体温度350℃;外标法测定含量。结果显示:TCA三个浓度日内精密度RSD≤2.835%,三个浓度日间精密度RSD≤9.42%,在三个不同温度下牛磺胆酸的稳定性RSD≤19.80%,平均加样回收率为96.35±1.896%。检测限为5ng/mL,定量限为20ng/mL。本研究采用的从羊胆汁中提取TCA的中试工艺与小试试验相比,TCA的纯度、提取量及回收率均略低,但TCA的生产成本较低,生产周期短,为从羊胆汁中提取TCA的工业化生产奠定了良好的试验基础。所建立的LC-MS/MS方法在准确度、灵敏度,稳定性等方面均能够满足TCA的定性和定量检测的要求。