黄芪和乳香提取物对NIH3T3细胞增殖的影响

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaoxiaoDang
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为了探讨生肌中药黄芪、乳香促进伤口修复机制,试验以小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3为研究对象,通过黄芪提取物和乳香提取物分别对小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3的生长干预,通过检测细胞增殖,细胞周期,组蛋白甲基化酶与去甲基化酶m-RNA增殖情况与ERK蛋白及p-ERK蛋白的变化,为黄芪与乳香在创伤愈合中的作用提供依据。试验以体外培养小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3,细胞传代,随机分为两组,对照组和药物干预组,加入不同浓度的黄芪提取物与乳香提取物干预细胞24h,分别采用CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期比例,RT-PCR的方法检测组蛋白甲基化酶与去甲基化酶增殖情况以及Western Blotting的方法检测ERK蛋白及p-ERK蛋白。实验结果如下:1.采用CCK-8法检测细胞增殖率:当黄芪提取物浓度为8×10-3g/L,1.6×10-3g/L,3.2 X 10-4g/L,乳香提取物浓度为4×10-1和8×10-2g/L时干预细胞24h,吸光度较对照组差异极显著(P<0.01)。2.采用流式细胞术检测细胞周期:当黄芪在浓度8×10-3g/L,1.6×10-3g/L,3.2×10O4g/L时,乳香提取物在浓度4×10-1g/L,8×10-2g/L和1.6×10-2g/L时干预细胞,S期比例较对照组差异极显著(P<0.01)。3.RT-PCR检测EZH1基因和EZH2基因表达:当黄芪提取物浓度为8×10-3、1.6×10-3和3.2×104g/L,乳香提取物浓度为4×10-1和1.6×10-2g/L时,EZH1基因表达与对照组相比差异极显著(P<0.01)。黄芪提取物浓度为8×10-3和1.6×10-3g/L时,乳香提取物浓度为4×10-1和8×10-2g/L时,EZH2基因表达与对照组相比差异极显著(P<0.01)。4.RT-PCR检测UTX基因和JMJD3基因表达:黄芪提取物浓度为1.6×10-3g/L时,UTX基因表达较对照组相比,差异显著(P<0.05)。黄芪浓度为3.2×10-4g/L时,乳香提取物浓度为8×10-2和1.6×10-2g/L时,UTXmRNA与对照组相比差异极显著(P<0.01)。黄芪提取物浓度为8×10-3和3.2×10-4g/L时,乳香提取物浓度为8×10-2和1.6×10-2g/L时,JMJD3基因表达与对照组相比,差异极显著(P<0.01)。5.加入信号通路抑制剂U0126后,RT-PCR检测EZH1基因和EZH2基因表达:当黄芪提取物浓度为8×10-3、1.6×10-3和3.2×10-4g/L时,乳香提取物浓度为当浓度为4×10-1和1.6×10-2g/L时,EZH1基因表达与对照组相比差异极显著(P<0.01)。黄芪提取物浓度为8×10-3和1.6×10-3g/L时,乳香提取物浓度为4×10-1、8×10-2和1.6×10-2g/L时,EZH2基因表达与对照组相比差异极显著(P<0.01),。6.加入信号通路抑制剂U0126后,RT-PCR检测UTX基因和JMJD3基因表达:黄芪提取物浓度为3.2×10-4g/L时,乳香提取物浓度为4×10-1 8×10-2和1.6×10-2g/L时,UTX基因表达较对照组相比差异极显著(P<0.01),黄芪提取物浓度为1.6×10-3和3.2×10-4g/L时,乳香提取物浓度为4×10-1 8×10-2和1.6×10-2g/L时,JMJD3基因表达与对照组相比差异极显著(P<0.01)。7.中药提取物对NIH3T3细胞ERK蛋白与p-ERK蛋白表达:黄芪提取物与乳香提取物作用细胞24h,ERK1/2无明显变化,p-ERK1/2与对照组相比,随着提取物浓度升高,p-ERK1/2增高。加入U0126后,ERK1/2蛋白没有发生明显变化,p-ERK1/2与对照组相比,随着提取物浓度升高,p-ERK1/2增高。
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