肺缺血再灌注损伤引起肺细胞凋亡的实验研究

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肺缺血再灌注(I/R)损伤可在多种临床情况下发生,包括心肺转流、肺栓塞与肺移植等,是肺移植后致使移植肺功能不全的一个主要原因。细胞凋亡作为对损伤的反应,是一种独特的单细胞死亡的形式。大量的实验表明细胞凋亡在恶性肿瘤、自身免疫性疾病等多种疾病过程中起着重要的调节作用,尤其是在器官移植方面。动物实验显示在肾、肠、脑、心、肝及肾上腺的缺血再灌注损伤后均有凋亡发生。目前,对于肺缺血再灌注损伤与细胞凋亡的关系知之甚少。本实验通过建立原位阻断肺门的大鼠肺缺血再灌注损伤模型,研究肺缺血再灌注损伤对肺细胞凋亡的影响。 方法:本课题分为两部分:一、参照Michael J.Eppinger的方法,建立原位阻断肺门的大鼠肺缺血再灌注损伤模型。二、按再灌注时间将动物分为8组,每组5只动物。I~VI组分别为再灌注30分钟、1、2、4、8及12小时组,第Ⅶ组为单纯缺血组,第Ⅶ组为对照组。凋亡细胞的检测使用TUNEL技术,即末端脱氧核着酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术,每个标本选择100个视野(×400)进行TUNEL阳性细胞计数。电镜观察凋亡细胞的形态学变化。 结果:一、建立了大鼠左肺原位缺血再灌注模型,符合生理环境,简单易行。二、在肺缺血再灌注后早期发生明显的肺细胞凋亡,肺凋亡细胞数在再灌注后2小时达到峰值。再灌注4小时后,凋亡细胞数略低于再灌注2小时组,再灌注8小时组与12小时组则进一步下降,至再灌注12小时组凋亡细胞数则与单纯缺血组无显著统计学差异。单纯缺血3小时而无再灌注的肺凋亡细胞数与对照组相比有轻度增高,但无统计学显著意义。
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