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乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤，严重威胁着患者的健康状态和生活质量。据统计约70%的乳腺癌患者肿瘤组织呈雌激素受体(ERα)阳性状态，这类患者在乳腺癌肿瘤发生、发展及转归过程中可表现为雌激素依赖状态，因此雌激素及雌激素受体状态的调控对这类患者显得更加重要。蛋白酶体调控子/共激活因子REGgamma参与乳腺癌、甲状腺癌、肝细胞癌、结直肠癌等多个人体恶性肿瘤病理、生理过程，文献报道REGgamma可以对肿瘤基因、抑癌基因及其蛋白表达产物发挥调控作用。REGgamma在人乳腺癌领域的研究报道数量非常稀少，目前我们对REGgamma在乳腺癌疾病过程中可能发挥作用的认识尚不明确。因此值得对REGgamma的生物学功能进行深入探索，这不仅是对现有REGgamma生物学功能理论、知识体系的有益补充，也可能为提高乳腺癌临床治疗效果提供新的切入点，为乳腺癌的诊断及治疗提供新的帮助。1. REGgamma在乳腺癌组织中高表达，REGgamma高表达状态与乳腺癌转移及不良临床预后正相关目的：探索REGgamma在人乳腺疾病患者乳腺组织及腋窝淋巴结组织中的表达特征，分析REGgamma不同表达状态与乳腺癌患者的病理学特征及临床预后之间的关联。方法：使用免疫组织化学(IHC)技术和免疫印迹(Western blot)技术，在136例乳腺癌患者和140例乳腺良性疾病患者组织标本中研究REGgamma表达特征。结果：1. REGgamma在人乳腺癌组织中高表达。136例乳腺癌标本中111例(81.6%) REGgamma呈阳性表达，其表达率显著性高于乳腺良性疾病(9/140，6.4%，p <0.001)，低于乳腺癌转移腋窝淋巴结组织(116/116，100%， p <0.001)。2.REGgamma阳性表达与乳腺癌患者较差的临床病理学特征相关联。我们研究发现REGgamma表达与下列因素无关：发病年龄(p=0.702)、月经状态(p=0.171)、孕激素受体progesterone receptor (PR)表达状态(p=0.211)以及人表皮生长因子受体-2human epidermal growth factor receptor-2(HER-2)表达状态(p=0.557)。但是REGgamma高表达与乳腺肿瘤的大小(p <0.001)、腋窝淋巴结转移状态(p <0.001)、肿瘤TNM分级(p=0.038)、组织学分化程度(p=0.001)和雌激素受体(ERα)表达状态(p <0.001)正相关。3. REGgamma高表达与乳腺癌患者不良临床预后正相关。乳腺癌患者5年生存分析(OS和DFS)结果提示：REGgamma低表达乳腺癌患者生存率显著性高于REGgamma高表达患者(p <0.05)，Cox多因素回归分析的结果显示REGgamma可能作为评估乳腺癌患者预后新的独立预测因子(OR=4.369, p=0.008)。结论：REGgamma在乳腺癌组织和腋窝癌转移淋巴结中高表达，REGgamma高表达与乳腺癌患者较差临床病理学特征以及不良预后正相关。2. MMTV-PyMT小鼠是研究乳腺癌活体中REGgamma表达模式理想动物模型目的：使用MMTV-PyMT人乳腺癌小鼠动物模型研究REGgamma在乳腺癌动物体内的表达特征。方法：使用免疫组织化学染色、免疫印迹等方法比较REGgamma在MMTV-PyMT(FVB/N-Tg MMTV-PyVT634Mul/J mice)乳腺癌小鼠动物模型和FVB(FVB/NJ，nontransgenic)对照小鼠乳腺癌组织、正常乳腺组织以及肺转移癌组织、正常肺组织之间表达的差异性。结果：1. REGgamma在MMTV-PyMT小鼠乳腺癌和肺转移癌组织中呈高表达。20只MMTV-PyMT小鼠中14只(70%)乳腺癌组织中REGgamma呈阳性表达，其表达率显著性高于FVB对照小鼠正常乳腺组织(0/20，0%，p <0.001)，低于MMTV-PyMT小鼠肺转移癌组织(20/20，100%，p=0.027)。2.免疫印迹检测显示FVB正常对照小鼠乳腺组织和肺组织中均未见REGgamma蛋白表达，MMTV-PyMT小鼠乳腺癌组织(p=0.0051)和肺转移癌组织(p=0.0190)中REGgamma蛋白均呈高表达。3.20只MMTV-PyMT小鼠(REGgamma高/低表达组各10只)的生存分析研究显示，REGgamma高表达的小鼠生存率(OS)显著性低于REGgamma低表达的小鼠。结论：MMTV-PyMT小鼠是人乳腺癌疾病过程的近似模拟，是研究REGgamma在乳腺癌动物体内表达的理想动物模型。REGgamma的表达水平可以反映MMTV-PyMT乳腺癌荷瘤小鼠的生存预后。3. REGgamma对人乳腺癌细胞增殖能力、运动能力和侵袭能力的影响目的：探索REGgamma对ERα阳性人乳腺癌MCF7和BT474细胞增殖能力、运动能力和侵袭能力的影响。方法：使用小RNA干扰(siRNA)技术、免疫印迹技术、细胞增殖检测技术(MTS)、细胞活动性检测技术以及侵袭小室检测技术(transwell)，比较REGgamma-siRNA处理前后人乳腺癌MCF7和BT474细胞表型的差异。结果：1.经过REGgamma-siRNA处理，乳腺癌MCF7(p=0.0033)和BT474(p=0.0114)细胞增值能力显著性下降。2.经过REGgamma-siRNA处理后，人乳腺癌MCF7(p <0.0001)和BT474(p <0.0001)细胞活动能力显著性降低。3.经过REGgamma-siRNA处理，乳腺癌细胞侵袭能力较对照组细胞显著性下降。MCF7细胞侵袭性由86.72%下降至24.84%，侵袭指数(invasion index)为0.2864；BT474细胞侵袭性由59.65%下降至23.43%，侵袭指数为0.3928。结论：乳腺癌细胞MCF7和BT474经过REGgamma基因下调处理后，细胞增殖能力、移动能力和侵袭能力均呈显著性下降，提示REGgamma可能具有促进乳腺癌细胞恶性进展的潜能。4. REGgamma通过泛素-蛋白酶体途径调控ERα蛋白表达目的：在乳腺癌MCF7和BT474细胞中探索REGgamma对ERα表达调控可能的机制。方法：使用小RNA干扰技术、免疫印迹技术、Real-time PCR定量分析技术、ERα蛋白半衰期检测技术及ERα-ubiquitin免疫共沉淀分析等技术手段，在人乳腺癌MCF7和BT474细胞中检测REGgamma对ERα表达的调控机制。结果：1.经过REGgamma-siRNA处理，MCF7(p=0.0108)和BT474(p=0.0065)细胞内ERα蛋白表达水平显著性下降，但是MCF7(p=0.3011)和BT474(p=0.2178)细胞内ERα转录mRNA表达水平未发生明显变化(p>0.05)。2.经过REGgamma-siRNA处理，ERα阳性人的乳腺癌细胞ERα蛋白半衰期(half-life time)显著缩短(REGgamma-siRNA处理后细胞的半衰期约2小时，control-siRNA对照组细胞的半衰期约4小时)。REGgamma-siRNA处理后，MCF7(p=0.0093)和BT474(p=0.0155)细胞中ERα蛋白降解速度显著性加快。3.蛋白酶体抑制剂MG132可以完全阻断REGgamma对ERα蛋白的降解的调控作用。4. ERα-ubiquitin免疫共沉淀分析结果显示：REGgamma可能通过泛素-蛋白酶体途径调控ERα蛋白的降解。REGgamma可以发挥类似ERα稳定剂样作用，抑制人乳腺癌MCF7和BT474细胞内ERα蛋白泛素化降解。结论：REGgamma对ERα表达的调控作用发生在ERα转录后水平，REGgamma可能在ERα经泛素-蛋白酶体途径降解的过程中发挥类似ERα稳定剂样作用，抑制ERα蛋白降解。