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实验目的神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)作为一种儿童常见的颅外实体肿瘤呈高度恶性。Notch信号传导通路与NB的发生密切相关,Notch活化复合酶(Notch activation complex kinase,NACK)是Notch信号通路重要的限速酶。本研究主要探讨应用脂质体介导siRNA转染人神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞下调NACK基因表达对细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。实验方法常规培养人神经母细胞瘤细胞SK-N-BE(2)。根据相关实验设计并合成NACK siRNA、NC si RNA,通过脂质体介导siRNA转染SK-N-BE(2)细胞,根据处理SK-N-BE(2)细胞方式的不同分为:实验组(NACK siRNA组)、阴性对照组(NC siRNA组)和空白对照组(control组)。在荧光显微镜下观测被转染的各组细胞的荧光情况;qRT-PCR、Western blot方法检测转染后NACK基因的沉默效率;CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组细胞凋亡的情况。最后再应用qRT-PCR、Western blot检测靶向抑制NACK表达后Notch1信号传导通路下游靶基因Hes1、c-Myc和n-Myc的表达情况。结果脂质体介导siRNA转染人神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞后细胞在荧光显微镜下呈绿色荧光。成功转染NACK siRNA的实验组细胞的NACK mRNA及其蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。CCK-8法检测到实验组细胞增殖较阴性和空白对照组相比受到明显抑制(P<0.01),流式细胞仪检测到实验组细胞凋亡亦较对照组明显增加(P<0.01)。Western blot、qRT-PCR对Notch1信号通路下游相关靶基因Hes1、c-Myc和n-Myc的蛋白水平和m RNA表达检测发现较阴性对照组及空白对照组均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脂质体介导的NACK siRNA转染神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞,可靶向抑制NACK基因的表达,进一步对Notch1信号传导通路起到抑制作用,从而导致了SK-N-BE(2)细胞增殖抑制、细胞凋亡增多,在此基础上发挥抗神经母细胞瘤作用。