粟酒裂殖酵母Mti2和Mti3蛋白对线粒体翻译的影响研究

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线粒体基因组(mtDNA)编码氧化磷酸化(OXPHOS)系统中的一小部分跨膜成分。这些基因的正常表达确保了 OXPHOS系统中的成分的合成。线粒体中的翻译起始是由两个通用的起始因子mIF2和mIF3协助的,细菌中mIF2和mIF3的同源蛋白对于蛋白合成和菌株的生长是不可缺少的。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中,缺失mIF3/Aim23并没有取消线粒体翻译,而是使得蛋白含量不平衡。在本文中,我们研究了粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中,mIF2/Mti2(SPBC1271.15c)和 mIF3/Mti3(SPBC18E5.13)蛋白对线粒体翻译的影响。首先,构建△mti2菌株和△mti3菌株。表型实验的结果表明,在发酵型培养基以及非发酵型培养基上,相对于yHL6381野生型菌株,△mti2菌株的生长受到了显著的抑制;△mti3菌株的生长没有受到抑制。Western Blot实验结果表明,Mti2和Mti3蛋白定位于线粒体基质;mti2基因的缺失使得mtDNA编码的Cob1、Cox1、Cox2、Atp6的稳定水平剧烈降低,而核基因编码的Cox4蛋白的稳定水平几乎不受影响。mti3的缺失并没有影响mtDNA编码的蛋白质的稳定水平。通过在体内用同位素标记由mtDNA编码的蛋白质的实验,我们发现,在△mti2菌株中,除了 Cob1和Atp6以外,其它的由mtDNA编码的蛋白质的合成均受到了影响。敲除mti2基因后,mtDNA编码的蛋白质的合成受到了显著的影响,并且Cob1和Atp6蛋白也变得非常不稳定。因此,mti2基因与mtDNA的翻译紧密相关。它是通过影响mtDNA编码的蛋白质的合成,使组成电子传递链的复合体受到破坏,导致线粒体不能正常发挥功能。除此之外,通过蔗糖密度梯度离心分离线粒体核糖体大小亚基,初步的结果表明,Mti2与核糖体大亚基(LSU)的分布类似,Mti3与核糖体小亚基(SSU)的分布类似。
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