马勃属伞菌亚纲(Agaricomycetidae)、伞菌目(Agaricales)、马勃科(Lycoperdaceae)的大型真菌,这一科除脱皮马勃(Lasiosphaera Fenzlii Reieh.)外还有大马勃[Calvatia gigantea (Batsch : pers.)Lloyd ]和紫色马勃[Calvatia lilacina(Mont. et Berk.)Lloyd]。马勃是一种很有开发价值和广阔应用前景的珍稀食药两用菌[1]。近代科学研究证明,马勃多糖具有特定的药理作用和功效。本文对影响马勃液体培养的理化因子进行了研究,以菌丝生物量作为指标,筛选出了适宜马勃液体培养的配方和培养条件;并对发酵产物中的马勃多糖进行了提取与分离纯化实验研究;同时初步研究了发酵培养基中分别添加中药材对菌丝生物量的影响。碳源筛选实验显示:在供试的6种碳源中,玉米粉为最佳碳源,而且价格便宜,适宜大规模工业化生产使用。氮源筛选实验显示:在供试的6种氮源中,黄豆粉对菌丝生物量的影响优于其他氮源,因此选择黄豆粉为最佳氮源。无机盐及生长因子显示:磷酸二氢钾、硫酸镁对菌丝的生长有促进作用。在碳源、氮源和无机盐的基础上,进行了培养基配比正交实验,确定了马勃液体发酵的最佳培养基配比为:玉米粉3.0%、黄豆粉1.5%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.1%。以碳源、氮源为影响因子的菌丝生物量响应面方程为: z =1.7950x+1.1967y-0.1967x2-0.1267y2-0.1850xy-2.9722式中:z—为菌丝生物量,x—为碳源,y—为氮源。液体发酵培养条件因子中研究了温度、pH值、装液量、转速、接种量、培养时间等因子对马勃液体发酵中菌丝产量的影响。结果为:马勃菌丝体在pH 6.7的条件下,按15%的接种量接种于装有100 ml最佳培养基的250 ml摇瓶中,在130 r/min振荡培养箱中26℃,恒温发酵培养96 h,即可得到大量的菌丝体。马勃粗多糖的提取工艺与提取时间、提取温度、提取次数、溶剂比等有密切关系。本实验采用热水浸提法,对这些单因素影响进行了逐一实验,得到马勃多糖的最佳提取时间为1.5 h,最佳提取温度为75℃,最佳提取次数为3次,最佳料液质量比为1:22。采用了Sevag法对马勃粗多糖进行去蛋白实验,设计了三因素三水平的正交实验,实验结果去蛋白质的最佳条件是Sevag溶液中氯仿和正丁醇的体积比为10:3,样品和Sevag溶液的体积比为1:1,振荡时间为15 min。本研究采用了大孔吸附树脂(AB-8)、DEAE-纤维素对马勃多糖进行了初步的分离,得到多糖含量相对稍高的两个组分R-A和R-B。为了进一步分离,根据分子量大小对R-A和R-B用凝胶柱层析(Sephadex G-100)进一步纯化,得到多糖含量较高的R-A1、多糖含量达到92.80%,R-B1多糖含量达到96.31%,由此可知通过凝胶柱层析(Sephadex G-100)可以很好地将多糖纯化和分级。初步研究了向马勃液体发酵培养基中添加不同中药材及中药材的不同添加量对马勃菌生长的影响,结果显示中药材对马勃菌的生长有不同程度的影响,为药用真菌和中药材共发酵的进一步研究奠定了基础。