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前言 肾小球疾病目前仍然是肾脏疾病中发病率最高的一种疾病,随着病程的进展,大多经过肾硬化(肾小球硬化和/或肾间质纤维化)的病理变化,最终导致终末期肾功能不全。在此病变过程中,涉及到许多细胞因子和细胞成分,其中转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)即为此过程中的重要调节因子,而肌成纤维细胞(myofibroblast,Myo-FB)则是加速肾硬化进展的主要细胞成分。TGF-β被证实是一种致纤维化因子,它通过多种途径诱导肾硬化的形成和发展。而Myo-FB是肾间质中成纤维细胞在炎症等因素作用下,经过表型转化而形成的。这种细胞的增殖可导致细胞外基质(ECM)的过量积聚,是导致肾硬化的直接原因。Myo-FB是具有平滑肌特征的细胞,可表达α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA),α-SMA在肾间质中已被用作Myo-FB的标志。为了进一步阐明肾小球肾炎中TGF-β与Myo-FB在导致肾硬化中的作用机制,及其在肾小球、肾小管间质中的表达与肾硬化的关系,我们选择了不同病理类型原发性肾小球肾炎患者42例,应用免疫组织化学方法检测不同程度肾小球硬化和肾小管间质病变中TGF-β1、α-SMA及构成ECM的主要成分胶原Ⅲ(COL-Ⅲ)的表达,并将它们与肾硬化程度及患者Scr和Ccr水平作相关性分析。旨在探讨肾硬化过程中涉及TGF-β1与Myo-FB的潜在作用途径,为肾硬化的早期防治提供理论依据。 实验材料 主要试剂和实验仪器: TGF-p;杜-SMA、COL-皿试剂盒刀AB显色剂(免疫组织化学方法)均购自于武汉博上德生物有限公司,光学显微镜(O-LYMPUS BX60,JaPan),图象处理系统(MetaMorph Image system””nion4·5,US)。 实验方法 二.研究对象及分组: 42例原发性肾小球肾炎患者均行经皮肾穿刺活检术,根据病理确定诊断,其中男22例,女20例,年龄15-60岁,平均c.64土*.18)岁。42例患者中按病理类型分为 4组:第一组为系膜增生性肾小球肾炎(MSPGN)11例,第H组为膜性肾病(MNN例,第三组局灶节段硬化性肾小球肾炎厂GS广 例,第四组硬化性肾小球肾炎瞩GN沁0例,具有完整的临床资料。正常对照组为正常肾组织4例。所有病例均排除心、肝、肺、胰腺、感染及系统性疾病,均为原发性肾小球肾炎。病理诊断标准参照2000年全国肾活检诊断研讨会修订的肾活检诊断标准。 2.肾活检组织免疫组织化学染色(ABC法X 常规石蜡切片染色程序,分别对肾活检组织进行TGF-p;刀-SMA、COL-皿免疫组织化学染色。 3.免疫组织化学染色半定量分析: TGF-p;止-SMA、COL-皿免疫组织化学表达采用半定量分析方法。根据光镜下免疫组织化学染色在肾小球、肾小管间质中的着色深浅程度及分布,用MetuMorph图象处理系统,测出灰度 ·2·值,进行统计学分析。 5.统计分析: 所有参数以 XIS表示,组间比较采用 t检验,应用 SPSS 9.0统计软件进行数据处理。肾小球*管间质中的TGF-p;似-SMA人OL-皿表达以及Scr和Ccr与肾硬化的程度的相关性采用多元相关分析。P<o.05视为差异有显著性,P<0.O二视为差异习常显著。 实验结果 1.TGF-民J-SMAJOL-皿在肾小球、肾小管间质中的表达 l·ITGF一 pl的表达: 正常对照组肾组织的肾小球的系膜细胞中末见TGF-p;的表达,而在肾小管上皮细胞胞浆中偶见TGF*p;的存在。不同病理类型的肾小球肾炎有不同的表达,随病变程度的加重,其表达显著增加。其表达主要分布于肾小球的系膜基质区、新月体中和小管间质的肾小管上皮细胞胞浆、间质成纤维细胞胞浆中、间质基质区和炎性细胞大量浸润区。 1.2 COL一皿的表达: 正常对照组肾组织中COL-皿分布于肾间质基质中,并随间质病变程度的增加而增加,COL,皿不表达于肾小球中。 * 3 a-SMA的表达: 。-SMA阳性细胞分布于肾小球肾炎的系膜细胞的胞浆中及血管平滑肌层,同时在肾小管上皮细胞内及局灶细胞浸润处均有a-SMA的表达,有些新月体亦有a-SMA的表达。在肾小球上a-SMA的表达MsPGN组表达最高,而FGS/GN肾小球上几乎无a-SMA的表达。在肾间质中a-SMA的表达,随病变程度的 ·3·加重,其表达显著增加。 2.肾硬化程度与TGF-p;、a-SMA、COL-皿表达之间的关系 TGF 民的表达与肾小球硬化程度成正比,a-SMA的表达与肾J球硬化程度无相关性。TGF-*、a-SMA、COL-皿的表达均与肾小管间质纤维化程度成正比。其中以 TGF-民相关性最高,其次是。一SMA,COL-皿的相关性最小。COL-皿在肾间质中的分布区域与TGF-p;0-SMA在间质中分布相似,随病变程度的加重,它们的表达亦逐渐增加。 3厂肾硬化中TGF-p;J-SMA、COL-Ill表达与患者Scr和Ccr之间的相关性 统计学分析?