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一、研究目的1.研究脑卒中患者中ABCBl基因多态性的分布特征。2.探讨脑卒中患者的ABCBl基因启动子区甲基化水平与基因多态性的相关性。3.初步探究脑卒中患者ABCBl基因多态性及启动子区甲基化水平与阿司匹林抵抗的相关性。二、研究方法1.检测样本的ABCBl基因的多态性本研究共纳入脑卒中患者302例,根据其血栓弹力图(thrombelastogram,TEG)的检测报告分组:阿司匹林抵抗(aspirin resistance,AR)组及阿司匹林敏感(aspirin sensitive,AS)组。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)和DNA直接测序两种方法共同对ABCB1基因的C1236T、G2677T/A和C3435T三个位点进行基因多态性的检测。脑卒中患者ABCBl基因各位点的基因多态性采用SHEsis软件进行在线分析。2.检测样本ABCBl基因启动子区的甲基化程度使用重亚硫酸盐修饰后的限制性内切酶(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)法对入组的脑卒中患者进行ABCBl基因启动子区甲基化水平的检测。使用COBRA法处理稀释好的DNA,利用PCR-RFLP技术对修饰后的DNA进行扩增,产物进行限制性内切酶酶切,将酶切好产物电泳分离,最后再扫描分析甲基化程度。3.统计方法全部数据均采用SPSS 23.0软件进行分析。AR组和AS组的三个位点的基因频率的比较使用X~2检验。AR组与AS组两组间的ABCB1基因启动子区甲基化水平运用Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis检验。P<0.05认为差异有统计学意义。三、结果1.脑卒中患者ABCBl基因多态性的分析在302例脑梗死患者的外周血提取的DNA中检测到,ABCBl基因的C1236T、G2677T/A和C3435T三个位点的频率均符合Hardy-Weinberg遗传平衡。在AR组和AS两组中,ABCBl基因C3435T的T等位基因频率分别为41.6%和54.7%(P=0.004)。在AR组中,(CT+TT)基因型的分布频率显著高于AS组(P=0.007)。但C1236T和G2677T/A两个位点在两组间的等位基因及基因型的分布频率未见明显差异(P>0.05)。2.样本的ABCBl基因启动子区的甲基化程度在302例脑梗死患者中,ABCBl基因启动子区甲基化水平的中位数为14.01%(0.14%-29.35%),AR组的个体ABCB1基因甲基化水平显著低于AS组(p<0.001)。此外,C3435T的CC、CT和TT基因型不同个体间的启动子区甲基化水平存在显著差异(P=0.006),而G2677T/A和C1236T两个位点不同个体间的启动子区甲基化程度差异无统计学意义P>0.05)。3.ABCBl基因启动子区的甲基化程度与血小板聚集之间的关系在对ABCBl基因启动子区甲基化水平与血栓弹力图测得的花生四烯酸(AA)诱导的血小板聚集抑制率(%)进行相关性分析后,发现ABCBl基因启动子区甲基化程度与AA%呈正相关(R=0.781,P<0.001)。四、结论本研究发现在中国脑卒中患者中,AR的发生与ABCBl的基因多态性显著相关。并且首次发现了脑卒中患者中,ABCBl基因启动子区甲基化程度在水平在AR组与AS组中存在明显差异。这提示了ABCBl的基因多态性和表观遗传学与AR之间可能存在某种关联,为探索AR的发生机制提供不同的方向。