【摘 要】
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多杀性巴氏杆菌属于巴氏杆菌科巴氏杆菌属,是一种革兰氏阴性短杆菌,可感染多种动物,引起禽霍乱、牛肺炎和出血性败血症,以及猪传染性萎缩性鼻炎和兔鼻瘘等。同样,该病原也是山羊和绵羊的重要病原,导致羊肺炎和出血性败血症的发生,严重威胁养羊业。根据荚膜抗原的不同,多杀性巴氏杆菌可分为A、B、D、E、F共5个血清型,且不同的血清型在一定程度上表现有宿主特异性。然而,目前对我国山羊源多杀性巴氏杆菌的血清型及其他
【基金项目】
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四川省科技计划重点研发项目（2021YFN0008）“肉羊健康养殖及优质安全羊肉生产关键技术集成与产业化示范”；
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多杀性巴氏杆菌属于巴氏杆菌科巴氏杆菌属,是一种革兰氏阴性短杆菌,可感染多种动物,引起禽霍乱、牛肺炎和出血性败血症,以及猪传染性萎缩性鼻炎和兔鼻瘘等。同样,该病原也是山羊和绵羊的重要病原,导致羊肺炎和出血性败血症的发生,严重威胁养羊业。根据荚膜抗原的不同,多杀性巴氏杆菌可分为A、B、D、E、F共5个血清型,且不同的血清型在一定程度上表现有宿主特异性。然而,目前对我国山羊源多杀性巴氏杆菌的血清型及其他重要生物学特性缺乏深入了解,这不利于山羊多杀性巴氏杆菌病疫苗的研制和该病的综合防控。同时,由于多杀性巴氏杆菌不同血清型之间没有良好的交叉保护作用,在研制疫苗时,需要针对特定宿主和地区所流行的优势血清型,针对性地研发疫苗,才能起到良好的疫苗免疫保护效果。据此,本研究从四川省多个规模化山羊养殖场采集样本进行多杀性巴氏杆菌的分子检测和分离鉴定,并对分离株的血清型、抗菌药物的耐药性、毒力因子携带情况等生物学特性进行分析。随后,选择4株分离自发病死亡山羊肺脏的菌株,通过对其致病性和免疫保护效果进行评价,筛选获得1株多杀性巴氏杆菌侯选菌株,从而为进一步研制商品化疫苗提供基础。本研究主要内容及结果如下:1.山羊源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其主要生物学特性研究为了掌握山羊中多杀性巴氏杆菌的感染情况及其主要生物学特性。本研究从四川省5个发生呼吸道疾病的规模化山羊场采集呼吸道拭子以及肺脏样本,提取其总DNA,利用多杀性巴氏杆菌种特异性PCR进行检测,同时进行多杀性巴氏杆菌的分离和鉴定。随后,对山羊源多杀性巴氏杆菌临床分离菌株的血清型、耐药性、毒力因子分布及omp A基因序列等进行分析。结果,山羊中多杀性巴氏杆菌的感染率为11.53%（34/295）,共分离获得27株多杀性巴氏杆菌;分离株的血清型均为荚膜D型,为该地区的优势血清型;毒力基因检测结果发现分离株均携带有丰富的毒力因子;耐药性分析表明,分离菌株对氨苄西林和多西环素高度敏感,其中来自双流和会东县两个羊场的菌株多重耐药的情况严重;omp A基因序列分析表明,其与感染宿主存在相关性。研究结果有力地丰富了我国山羊源多杀性巴氏杆菌的生物学特性,为多杀性巴氏杆菌的疫苗研制和综合防治提供了依据。2.D型多杀性巴氏杆菌疫苗候选株的筛选为了筛选获得D型多杀性巴氏杆菌疫苗候选菌株,用于疫苗研制和山羊多杀性巴氏杆菌病的防制,本研究以4株分离自发病死亡动物肺脏中多杀性巴氏杆菌（Pm1、Pm2、Pm3、Pm4）为对象,测定各菌株对小鼠的LD50,以及免疫小鼠后的免疫应答水平和交叉攻毒保护能力。结果,Pm1、Pm2、Pm3、Pm4菌株对小鼠的LD50分别为2.70×10~5 CFU/0.5m L、2.57×10~4 CFU/0.5m L、3.09×10~5CFU/0.5m L、9.29×10~5 CFU/0.5m L,均具有较强的致病力,能引起小鼠肝、脾、肺、肾、脑等多个器官的病理损伤。采用各菌株制备的灭活疫苗免疫小鼠后均能刺激机体产生良好的抗体水平,其中Pm2株诱导产生的抗体水平最高;交叉攻毒保护试验结果也表明,采用Pm2免疫小鼠后对各菌株的人工感染具有最好的免疫保护作用,用该菌株制备的灭活疫苗免疫山羊后,可诱导山羊产生良好的体液免疫应答。因此,Pm2有进一步开发研制D型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗的潜力。总之,本研究对山羊多杀性巴氏杆菌的感染情况进行分子检测,分离获得27株多杀性巴氏杆菌菌株,并对其生物学特性进行了分析。在此基础上,筛选了1株毒力强、免疫原性好、免疫保护率高的菌株作为疫苗侯选株。研究结果为山羊多杀性巴氏杆菌病的综合防治提供了有用的依据。
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