【摘 要】
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背景自噬是细胞进行细胞组分降解和营养物质再利用的重要的分解代谢途径。线粒体是细胞中重要的能量代谢枢纽。线粒体自噬属于选择性自噬,在维持细胞内环境当中起到重要调控作用,主要通过清除功能异常和受损的线粒体并减少线粒体数量的方式来应对外界的各类应激反应。线粒体自噬针对病毒起到双刃剑的作用,不仅有抑制病毒复制的作用,也扮演者有助于病毒复制的角色。B细胞慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤因子3（B-cell CLL
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背景自噬是细胞进行细胞组分降解和营养物质再利用的重要的分解代谢途径。线粒体是细胞中重要的能量代谢枢纽。线粒体自噬属于选择性自噬,在维持细胞内环境当中起到重要调控作用,主要通过清除功能异常和受损的线粒体并减少线粒体数量的方式来应对外界的各类应激反应。线粒体自噬针对病毒起到双刃剑的作用,不仅有抑制病毒复制的作用,也扮演者有助于病毒复制的角色。B细胞慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤因子3（B-cell CLL/lymphoma 3,BCL3）最初发现于B淋巴细胞白血病,与B细胞发育、感染免疫有关,在细胞中分布于胞质和胞核。根据序列同源性,BCL3分子分类为IκB家族成员,然而越来越多的研究证明BCL3不仅调控NFκB信号途径,还调控其它细胞进程。我们的前期研究发现,BCL3在HTLV-1感染细胞中表达上调,促进细胞自噬,调节HTLV-1病毒的复制,然而,BCL3调控自噬的详细机制并称不清楚。目的探索HTLV-1病毒感染细胞中BCL3对线粒体自噬的调控的分子机制。方法1.利用MT2/Jurkat细胞与Hela细胞共培养,以及体外高表达BCL3蛋白的方法,提取线粒体,western blot技术检测蛋白水平上BCL3在细胞内的定位。2.利用免疫共沉淀技术和western blot技术检测外源性和内源性的BCL3与LC3的相互作用。3.利用片段缺失突变、点突变等研究策略解析BCL3和LC3相互作用的domin。4.利用细胞免疫荧光技术和共聚焦显微镜技术检测BCL3蛋白在Hela细胞中定位及对线粒体自噬的影响。结果1.与实验对照组相比,在HTLV-1病毒感染状态下,以及BCL3高表达情况下,胞浆中的线粒体转移到线粒体上,富集于线粒体上。2.序列比对分析,BCL3含有能与LC3相互作用的motifs,免疫共沉淀实验证实BCL3和LC3发生相互作用。3.对BCL3基因进行片段缺失和点突变,通过免疫共沉淀检测到与LC3相互作用的BCL3的domin位于C末端。4.通过细胞免疫荧光和共聚焦技术,体外证实,BCL3通过与LC3结合,介导线粒体自噬的发生,促进溶酶体降解线粒体。结论在HTLV-1病毒感染状态下,胞浆中的BCL3蛋白转移到线粒体膜上,作为线粒体介导线粒体的自噬性降解。
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