自组装花生蛋白微球制备、特性与应用研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:sarahfung
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蛋白质作为一种来源于自然的生物可降解的高分子材料,具有较高的生物相容性、和安全性,在药物/营养素运载方面得到了普遍的应用。花生蛋白作为大宗优质的植物蛋白,资源丰富,营养价值高,在作为药物/营养素运送载体方面具有良好的开发潜能。自组装法在制备以蛋白为基质的运载材料方面具有制备方法简单、操作便捷、易于产业化、安全无毒等特点。本研究的目的在于制备以花生蛋白为基质材料的生物活性物质运载系统,主要内容包有:利用蛋白质的自组装现象,通过Ca2+诱导制备花生蛋白微球,并考察其理化性质及细胞毒性;以白藜芦醇为药物模型,制备载白藜芦醇花生蛋白微球,并对其理化性质、载药性能以及微球对白藜芦醇的保护效果进行分析;考察载白藜芦醇花生蛋白微球在模拟胃肠pH条件下的缓释效果,明确载白藜芦醇花生蛋白微球的抗肿瘤活性。主要结论如下:利用蛋白质自组装现象通过Ca2+诱导制备得到花生蛋白微球,以粒径及多分散指数(Polydispersity Index, PdI)为评价指标,基于单因素实验,通过正交试验设计确定了最佳的制备工艺为:实验pH 10.94,花生分离蛋白最终浓度2.98 mg/mL,CaCl2浓度5.05mmol/L,在此条件下花生蛋白微球的粒径为(94.66±0.53)nm。通过测定粒径、PdI和外观形貌对花生蛋白微球进行理化性质分析,并通过细胞实验评价其细胞毒性。花生蛋白微球悬浮液形态均一,粒度分布均匀,经透射电子显微镜观察,呈球形且分散性好;经喷雾干燥处理后得到乳白色粉末,可重新分散于水;在各实验条件下,具有良好的热稳定性,模拟胃肠pH条件稳定性及稀释稳定性,在4℃条件下其干态样品可长期储存达60天;当浓度为0.9375-15mg/mL时,花生蛋白微球对人正常肝细胞LO2和胃细胞GES1的增殖活力无明显抑制作用(两种人正常细胞的生长活力均在90%以上),对人正常细胞无毒性。以白藜芦醇为药物模型,制备了负载白藜芦醇的花生蛋白微球,采用动态光散射及傅里叶变换红外光谱分析对载白藜芦醇花生蛋白微球进行表征,结果表明,在白藜芦醇添加量增多的过程中,花生蛋白微球的粒径也呈增加趋势;透射电镜下可观察到圆整度良好不粘连的载白藜芦醇花生蛋白微球。随白藜芦醇添加量的增加,包封率先增大后减小,当白藜芦醇添加量为0.7%时,包封率达到最高为82.7%;而载药量呈逐渐增大趋势。负载白藜芦醇后,花生蛋白微球的稳定性良好,而经花生蛋白微球包载后,白藜芦醇的光稳定性显著提高。体外释放度实验结果表明,载白藜芦醇花生蛋白微球对白藜芦醇具有显著的缓释效果,体外释放规律符合Ritger-peppas方程:lnQ=0.70971nt-1.692 (R2=0.9950),释放机制为扩散和骨架溶蚀协同作用。体外细胞实验结果表明,载白藜芦醇花生蛋白微球对人胃癌细胞BGC823和人肝癌细胞HepG2的增殖活力有极显著的抑制作用,且对人肝癌细胞HepG2的抑制效果更佳,具有良好的抑瘤作用。
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