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目的：非小细胞肺癌(NSCLC)是当代世界常见恶性肿瘤之一，已居多数国家癌症死亡原因的首位。近些年来新的分子靶向药物表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）的出现为NSCLC的治疗带来了曙光。吉非替尼是一种口服的有活性、选择性的EGFR-TKIs，目前已成为肺癌分子靶向治疗中较为成熟的药物。临床研究已表明，吉非替尼单药治疗各种类型NSCLC的总有效率仅为10%～20%，因此人们希望与其他药物联合应用以进一步提高抗肿瘤效应。康莱特注射液是一种中药制剂，由中药薏苡仁中提取出的薏苡仁油制成,研究表明其对多种肿瘤细胞均能有较强的杀伤及抑制作用。一些小样本临床研究发现，康莱特联合化疗能显著提高晚期NSCLC的治疗效果。目前已有许多研究证明PI3K/Akt信号通路在NSCLC的发生、发展中起重要作用。约有50%-70%的NSCLC中存在Akt的磷酸化即p-Akt，这表明PI3K/Akt信号通路的激活在NSCLC中很常见。c-Met蛋白是一种由原癌基因c-Met编码、具有酪氨酸激酶活性的生长因子受体,可与肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)特异性结合,激活下游一系列信号转导通路,调控细胞的增殖、活力、迁移、血管形成、侵袭以及形态发生等。c-Met信号的改变能促进肿瘤的发生和发展。有研究结果显示在NSCLC中非靶受体c-Met继发性过表达与吉非替尼的继发性耐药有关。本实验应用一系列实验方法，通过检测药物处理后的人肺腺癌A549细胞株中细胞凋亡率、p-Akt及c-Met的mRNA及蛋白等的表达来探索吉非替尼联合康莱特对A549细胞株的作用及其机制。方法：1体外培养肺腺癌A549细胞，选取对数生长期细胞进行实验。实验分为空白对照组，吉非替尼组，康莱特组，吉非替尼联合康莱特组；吉非替尼组设置浓度梯度为：0.1、0.5、1、5、10、20、40μmol L，作用时间：24h、48h、72h；康莱特设置浓度梯度为：5、10、20、40、80、100、160μl ml,作用时间：24h、48h、72h；联合用药组：根据康莱特抑制率求IC50，吉非替尼选择本实验中最高作用浓度；应用四甲基偶氮唑蓝（tetrzolium-based colorimetric assay，MTT）法分别测定各药物不同浓度、不同作用时间的抑制率。2根据MTT结果，康莱特IC50=80μl ml，故联合用药组康莱特取80μl ml，吉非替尼选择本实验中最高作用浓度40μmol L，共同处理48h后，应用流式细胞学检测各处理组中对细胞生长的抑制情况。3选取对数生长期细胞置入六孔板培养，组别设置同上。倒置显微镜下观察细胞形态学变化。采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（streptavidin-perosidase，SP）染色法检测各组药物处理后细胞内p-Akt、c-Met蛋白含量的变化。4取对数生长期细胞，组别设置同上。药物作用48h后提取RNA，检测总RNA的量、纯度及完整性，通过逆转录-聚合酶链反应（reversetranscription PCR，RT-PCR）半定量检测药物处理后细胞内c-Met mRNA的表达水平。5实验数据经SPSS18.0统计处理,采用正态性检验,以P<0.05表示差异显著， P<0.01表示差异非常显著。结果：1MTT结果显示：1.1与对照组相比,随着康莱特浓度及作用时间的增加，对A549细胞的抑制率逐渐升高,其抑制作用有剂量效应及时间效应依赖关系；1.2联合用药组：康莱特联合吉非替尼培养48h后，两药联合作用抑制率高于各单药组，有统计学意义（P<0.05）；1.3与对照组相比，吉非替尼组对A549细胞有一定程度的抑制作用，但作用并不明显。2流式细胞学结果显示：2.1作用于细胞48h后，各单药组及联合用药组细胞凋亡率均显著增加；2.2联合组的细胞凋亡率高于单药康莱特组、单药吉非替尼组，有显著性差异(P<0.05)；3免疫组织化学检测结果显示：与对照组相比，康莱特组作用于A549细胞48h后，均能下调p-Akt、c-Met蛋白表达阳性率，P<0.05；吉非替尼组作用不明显，P>0.05；联合用药组较吉非替尼组显著下调p-Akt、c-Met蛋白表达，P<0.05。4RT-PCR结果显示：4.1康莱特组c-Met mRNA表达水平较对照组下调，吉非替尼组则无明显作用；4.2两药联合组c-Met mRNA表达水平较对照组及吉非替尼组均下调明显。结论：1康莱特对人肺腺癌A549细胞株的抑制率在一定范围内随着药物浓度、作用时间的增加而增加，并呈剂量-时间依赖性；康莱特联合吉非替尼作用于A549细胞株48h的抑制率高于各单药处理组；根据金氏公式计算q值，表明两药联合可能具有一定的协同增效作用。2康莱特组、吉非替尼组作用48h后可诱导肿瘤细胞凋亡，；联合组凋亡率高于对照组、单药康莱特组、单药吉非替尼组（P﹤0.05）。3康莱特联合吉非替尼组在转录水平及蛋白水平下调p-Akt、c-Met较单药康莱特组明显，推测康莱特可能从PI3K/Akt信号通路发挥抗肿瘤作用，并可能改善吉非替尼的耐药作用。