温度对鲁米诺—过氧化氢体系化学发光的影响及牛血清白蛋白的测定研究

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在化学发光过程中,溶液中参与反应的化学环境对分子化学发光反应产生很大的影响。了解和利用这些环境因素,可以提高化学反应发光的强度及量子产率,从而提高检测的灵敏度和选择性。本文系统的研究了重要的化学反应环境之一:温度对鲁米诺—过氧化氢化学发光体系的影响。总的说来,影响化学发光的化学环境主要有:反应的介质、溶液的pH值、表面活性剂和温度。前人在前三个方面做了大量的研究。但是,温度对化学发光的影响的研究却比较少。通常衡量温度与化学发光强度的关系是采用vant’s Hoff Coefficient:Q10=IT+10/IT,即每隔10℃时,两者之间的化学发光比值,并用比值的大小来描述化学发光受温度的变化情况。但是该公式不能从整体上衡量所研究的化学发光体系受温度影响的变化情况。因此,找到一个温度与化学发光强度的定量关系有很大的实际意义。本文选用最常见的鲁米诺一过氧化氢化学发光体系,研究了相同的鲁米诺—过氧化氢混合溶液的最大化学发光强度与温度的关系。结果发现,其最大发光强度的对数与温度的倒数成线性关系ln Imax=—0.3392/T+6.0896,相关系数为0.9926,连续检测5次的相对标准偏差小于5%。同时,我们也研究了温度对金属离子—鲁米诺—过氧化氢的影响。我们选择Co(Ⅱ)、Cu(Ⅱ)、Cr(Ⅲ)、Fe(Ⅱ)和Mn(Ⅱ)作催化剂,研究在不同温度条件下对鲁米诺—过氧化氢化学发光的催化能力。结果发现随着温度的升高,Co(Ⅱ)、Cu(Ⅱ)和Cr(Ⅲ)催化鲁米诺—过氧化氢后产生的化学发光强度是先升高后降低;且Co(Ⅱ)、Cr(Ⅲ)在40℃左右时对鲁米诺—过氧化氢的化学发光的强度出现最大值,Cu(Ⅱ)在60℃左右时化学发光的强度出现最大值。而Fe(Ⅱ)、Mn(Ⅱ)催化的结果却与此相同,随着温度的升高,化学发光的强度却一直升高。这一现象对我们今后运用金属离子—鲁米诺—过氧化氢的化学发光体系具有指导意义。在实验允许的条件下,我们可以选择恰当的温度,来提高化学发光的灵敏度。另一方面,我们还研究了金属离子—鲁米诺—过氧化氢的化学发光反应机理:在碱性条件下,金属离子会与氢氧根离子形成沉淀,同时又与鲁米诺形成六元环的螯合物,二者在反应过程中相互竞争,然后六元环的金属螯合物被过氧化氢氧化成反应的中间体叠氮醌,最后被氧化成激发态的3—氨基邻苯二甲酸根离子而发光。另外,我们以邻苯二腈、硫酸锌为原料,采用微波固相法合成了锌酞菁。将锌酞菁磺化所得的磺酸基锌酞菁溶液与牛血清白蛋白作用将导致共振瑞利散射显著增强。在470mn处存在一共振散射强峰,牛血清白蛋白在0.25~20ug/mL的浓度范围内与散射强度(△I)呈线性关系,磺酸基锌酞菁溶液对牛血清白蛋白的检测限为0.17ug/mL,并且方法有较好的选择性。由此建立了一种用共振散射光谱测定牛血清白蛋白的简便、快速的新方法。
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