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目的:1.建立关苍术血清药物化学的实验方法。2.采用HPLC法研究灌胃关苍术大鼠血清指纹图谱,同时初步探讨灌胃关苍术水提取物后的大鼠血中移行成分;采用气流吹扫微注射器萃取法与气相质谱法联用的方法(简称GP-MSE-GC-MS法)分析灌胃关苍术药材水提取物后大鼠血中挥发性和半挥发性成分,为关苍术药材的质量控制提供实验基础。3.采用HPLC法对关苍术、白术及苍术进行移行成分初步比较,比较这3种苍术属植物的相似性,为苍术属植物的合理开发利用提供实验基础。方法:1.关苍术含药血清HPLC分析选择关苍术血清药物化学实验中较为重要的几个因素,每个因素设置一些不同的实验条件进行HPLC分析,以关苍术给药血清和空白血清HPLC图谱相比,峰形较好,移行成分最多的实验方法为本研究中采用的实验方法。即设240 nm、254 nm、270 nm和340 nm 4个波长,筛选最佳检测波长;设甲醇、乙腈和水的不同比率为不同洗脱条件进行实验,探索最佳流动相;比较A(1次/d)、B(2次/d)、C(3次/d)、D(2次/d共2天)和E(2次/d共3天)的不同的大鼠给药方式,确定较好的给药方法;设关苍术水提取、甲醇提取、超临界提取和粉末混悬液,探索较好的灌胃溶液;比较高氯酸法、甲醇沉淀法和冷冻干燥-甲醇沉淀血清处理方法,确定最适合的方法。2.关苍术含药血清GP-MSE-GC-MS分析将含药血清和空白血清冷冻干燥,取冷冻干燥血清粉末,用GP-MSE法萃取其中挥发油和半挥发性成分,按照如下GC-MS分析条件测定其挥发性成分,并进行分析比较。GC-MS分析条件:DB-5MS石英毛细管柱(30 m×0.25 mm ×0.25μm),载气为He(纯度≧99.99%),流速为1 mL/min。采取不分流进样,进样量为2.0μL。采用程序升温,进样口的温度为280℃。起始温度为45℃,保持1 min,4℃/min升高至250℃,再以6℃/min升高至280℃,保持5 min。离子源为EI,温度为200℃,其轰击能量为70 eV。3.关苍术、白术及苍术血中移行成分初步比较通过HPLC色谱图分析比较空白血清,含药血清和水提取液的色谱峰异同,探讨灌服关苍术、白术和苍术水提取物后大鼠血中移行成分。结果:1.关苍术含药血清HPLC分析水为最佳提取溶剂;给药三天(每天二次)为最佳给药方式;冷冻干燥-甲醇沉淀法为较好的血清处理方法;340 nm和240 nm为较适合的检测波长;水(A)和乙腈(B)的混合液的梯度洗脱较好,即340 nm为检测波长时洗脱梯度为:0-10 min 40%B-50% B,10-15 min 50%B-50% B,15~40 min 50%B-65% B,40~50 min 65% B-95% B,50~60 min 95% B-100%,60~65 min100% B~40% B;240 nm为检测波长时洗脱梯度为:0-8 min 40%B-50%B,8-28 min 50% B~75% B,28~40 min 75% B-90% B,40-60 min90%B-100%B,60-65min 100% B~40% B。通过实验建立了240 nm和340 nm检测波长条件下的关苍术血清指纹图谱,与空白血清比较分别产生7个和6个新的峰。2.关苍术GP-MSE-GC-MS分析与空白血清比较,灌胃关苍术水提取物、甲醇提取物和粉末混悬液的大鼠血清色谱峰中分别有1个、4个和4个新的峰。根据质谱NISI 08数据库检索和并参考相关文献,初步鉴定关苍术水提取物、甲醇提取物和粉末混悬液的大鼠血清GC-MS总离子流图中共有1个成分即均为Cystine(胱氨酸),甲醇提取物中鉴定出6-乙烯基-4,5,6,7-四氢-3,6-二甲基-5-异丙烯基-(S)-香豆酮(Benzofuran, 6-ethenyl-4,5,6,7-tetrahydro-3,6-dimethyl-5-isopropenyl-, trans-)和马铃薯螺二烯酮(solavetivone),其他均未鉴定。在药材GC-MS总离子流图中也检测到6-乙烯基-4,5,6,7-四氢-3,6-二甲基-5-异丙烯基-(S)-香豆酮(Benzofuran, 6-ethenyl-4,5,6,7-tetrahydro-3,6-dimethyl-5-isopropenyl-, trans-)和铃薯螺二烯酮(solavetivone)。2.关苍术、白术及苍术血中移行成分初步比较研究240 nm为检测波长分析时关苍术和苍术药材中有1个相似成分进入血液;340nm为检测波长分析时关苍术、白术和苍术各有1个相似的成分进入血液;关苍术和苍术药材中有2个相似的成分进入血液。结论:1.所建立的关苍术含药血清HPLC法简便、准确,可用于关苍术血清移行成分的分析研究。2.关苍术药材的血清移行成分主要来自原药材原型成分、代谢产物或受关苍术刺激而产生的应激产物两个方面。3.3种苍术属植物的血中移行成分的行为中,关苍术与苍术的血清移行成分更相近。