论文部分内容阅读
鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）是院内感染常见条件致病菌,该菌耐药严重,临床上常将舒巴坦作为治疗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌感染的重要药物之一。然而,鲍曼不动杆菌对舒巴坦的耐药率也在逐年增加,这无疑进一步加大了抗感染治疗难度。TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白是介导鲍曼不动杆菌对舒巴坦耐药的重要机制,本研究采用实时荧光定量RT-PCR技术,检测编码基因blaTEM-1及carO基因mRNA相对表达量,探讨TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白在耐舒巴坦鲍曼不动杆菌临床株中所起作用。研究目的研究TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白在转录水平的相对表达量,探讨TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白介导的鲍曼不动杆菌临床株对舒巴坦的耐药机制。材料与方法1、菌株来源及分组本实验中24株鲍曼不动杆菌临床株分离自2010年1月—2015年6月天津医科大学第二医院患者痰液、尿液。根据药敏试验结果分为舒巴坦敏感株6株,归为敏感组,非敏感株18株（耐药12株,中介6株）,归为非敏感组。全部临床株经生化反应证实为鲍曼不动杆菌。2、药敏试验应用纸片扩散法（Kirby-Bauer,K-B）检测实验菌株对氨苄西林、环丙沙星、美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮、庆大霉素等药物的敏感性。3、PCR扩增blaTEM-1和carO基因,检测实验菌株blaTEM-1基因、carO基因携带率;随机选取4株blaTEM-1阳性菌株,对其扩增产物测序,BLAST软件分析,明确是否存在blaTEM-1基因突变。4、RT-PCR提取鲍曼不动杆菌实验菌株总RNA,应用RT-PCR技术检测2组菌株blaTEM-1和carO基因mRNA转录情况,探讨TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白的mRNA表达量的高低在鲍曼不动杆菌对舒巴坦耐药中的影响。实验结果1、24株受试鲍曼不动杆菌临床株中,舒巴坦敏感组对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮、环丙沙星、庆大霉素、氨苄西林耐药率分别为1/6、2/6、3/6、1/6、5/6、5/6;舒巴坦非敏感组分别为6/18、10/18、18/18、18/18、18/18。2、舒巴坦敏感组中未检出blaTEM-1,舒巴坦非敏感组中有16株扩增出blaTEM-1;24株临床菌株全部扩增出carO基因。测序显示4株临床株blaTEM-1基因均未出现有义突变;A3、A5、1327启动序列为P4,C1为P3。3、BlaTEM-1基因阳性菌株mRNA相对表达量与其对舒巴坦MIC值呈正相关（rs=0.551,P=0.027）;carO基因mRNA相对表达量在舒巴坦敏感组和非敏感组中无差异。结论1、本实验中,受试菌株,尤其是对舒巴坦不敏感的鲍曼不动杆菌临床株,对临床常用抗生素如β-内酰胺、喹诺酮、氨基糖苷甚至碳青霉烯耐药严重。2、本实验中,鲍曼不动杆菌受试株对舒巴坦的耐药机制主要与TEM-1型β-内酰胺酶高表达有关,而blaTEM-1基因启动子调控可能是TEM-1型β-内酰胺酶高表达的原因之一。