【摘 要】
:
苦皮藤作为重要的药用植物,其次级代谢产物苦皮藤素V是使用较为广泛的绿色农药。本课题组在分析苦皮藤素V的合成路径时,推测其骨架合成关键酶为桉叶烷型倍半萜合成酶,因此本课题以苦皮藤根部转录组数据中筛选出的倍半萜合成酶基因Ca TPS1为研究对象,对其进行了研究,具体内容如下:通过生物信息学分析可知Ca TPS1基因的开放阅读框全长1662 bp,编码553个氨基酸,且含有Rx R、DDxx D和NSE
论文部分内容阅读
苦皮藤作为重要的药用植物,其次级代谢产物苦皮藤素V是使用较为广泛的绿色农药。本课题组在分析苦皮藤素V的合成路径时,推测其骨架合成关键酶为桉叶烷型倍半萜合成酶,因此本课题以苦皮藤根部转录组数据中筛选出的倍半萜合成酶基因Ca TPS1为研究对象,对其进行了研究,具体内容如下:通过生物信息学分析可知Ca TPS1基因的开放阅读框全长1662 bp,编码553个氨基酸,且含有Rx R、DDxx D和NSE/DTE保守序列,系统进化树分析将其聚类到TPS-a亚家族。近缘物种雷公藤来源的Tw TPS12基因与Ca TPS1基因有高度同源性,因此本实验将两者构建到同一表达体系中,得到重组菌株WQ011p RS426-Ca TPS1和WQ011 p RS426-Tw TPS12,使用GC-MS检测发酵产物,确认Ca TPS1为桉叶烷型倍半萜合成酶,其主产物为β-桉叶醇,产量为0.697 mg/L,Tw TPS12也是桉叶烷型倍半萜合成酶,其主产物为α-桉叶醇,产量为0.602mg/L。本课题构建了原核表达载体p ET28a-Ca TPS1并导入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,经SDS-PAGE分析,确定最优诱导条件为0.2 m M IPTG 16?C低温诱导24 h。使用纯化出的Ca TPS1蛋白进行体外酶促反应,分析其酶学性质,结果显示最适反应时间为60 min,且在28?C、p H 6.4下酶活力最高,酶促动力学常数Km为6.26±0.25μM,Kcat为(1.764±0.014)×10-3s-1。本课题使用同源模建技术构建了Ca TPS1-FPF-(Mg2+)3和Tw TPS12-FPF-(Mg2+)3复合物的结构模型,确认了构成蛋白质疏水口袋的氨基酸,并选择Ca TPS1的TRP276、ILE300、TYR379和ASP448进行定点突变,得到四株突变菌株WQ011 p RS426-Ca TPS1 W276Y,WQ011 p RS426-Ca TPS1 I300G,WQ011p RS426-Ca TPS1 Y379F和WQ011 p RS426-Ca TPS1 D448E,突变菌株的产物种类均有变化。分析结果显示,TRP276对Ca TPS1疏水口袋的形态有支撑作用,ILE300是导致Ca TPS1与Tw TPS12产物双键位置不同的原因之一,TYR379参与到质子转移的反应体系当中,而ASP448使Ca TPS1能够正确结合金属离子。本课题从功能和结构两方面初步探究了苦皮藤来源的Ca TPS1的催化机制,并分析了其酶学性质,为未来研究苦皮藤素V的合成机制提供了理论依据。
其他文献
随着信息技术的快速发展,数字电视已深入千家万户,数字电视网络也变的日益庞大、复杂,如何高效的监控管理数字电视网络中的设备成了各级广电部门首要面对的问题。为满足对数
随着无线通信的快速发展和普及,室内无线定位作为一项新兴信息服务技术对社会的基础支撑作用日益显著。如何提高定位精度和增加用户新体验是室内无线定位待解决的核心问题。
随着Android所占市场份额的不断增长,Android平台上的应用程序也越来越多。由于Android系统的开源性、Android应用商店缺少有效的审核机制,这就导致Android应用程序面临很大
大量研究表明,几乎所有工业上常用的材料都会产生微生物引起的腐蚀。且近几十年来,国内外学者一直致力于微生物腐蚀及其抑制的研究。遗憾的是,研究者对于抑制微生物腐蚀的研究主要基于电化学方法,鲜少采用生物学方法。基于以上原因,作者选取Biological TreatmentofMicrobial Corrosion:Opportunities and Challenges的第五章 Biological T
随着高光谱遥感卫星技术的发展,遥感影像的光谱、空间分辨率得以快速提升、甚至达到亚米级,其包含的信息量也趋于复杂、多样。其中,遥感影像融合是分析复杂遥感信息的一个重要步骤。影像融合是指卫星所获取的低空间分辨率的多光谱影像与高空间分辨率单波段的全色影像进行融合,得到同时具有高分辨率、多光谱特征融合影像的遥感技术。影像融合算法依据融合层次的不同可分为:像素级影像融合、特征级影像融合和决策级影像融合。由于
研究目的干眼是一种高度流行的多因素眼表疾病,影响患者的生活质量、降低患者的工作效率。干眼的管理和治疗手段多种多样,其中局部滴眼液给药是将药物递送到眼球表面的最简单、侵入性最小的途径。由于传统滴眼液生物利用度较低,开发一种同时包含抗炎药物和人工泪液的剂型有望提高干眼的治疗效率。本研究旨在制备羧甲基纤维素修饰的他克莫司微晶,使其同时具备抗炎和润滑的双重作用,并延长在眼球表面的作用时间,从而为干眼的治疗
随着人类环保意识的提升及化石能源局限性的凸显,需求侧供能系统节能减排、促进可再生能源消纳、优化能源结构的任务迫在眉睫,而建设区域综合能源系统是实现该系列目标的重要方式之一。合理规划是建设环保、高效区域综合能源系统的重要前提,然而现有规划方法存在多能耦合灵活性缺失、系统架构影响经济性、模型通用性差等问题。因此,亟需研究架构灵活、模型通用、求解便捷的区域综合能源系统规划方法。本文重点研究了能量枢纽物理
现代生理学中没有把人体按平衡作用分类的概念,只有内环境稳定(Homeostasis)一词。根据本文作者多年的研究,特别根据对于经络的研究,发现人体内环境稳定是人体平衡作用的一个
目的:早期诊断是一些疾病诊治的关键,具有重要临床意义。早期诊断方式主要有两种:通过医学设备进行诊断和对生物学特异性的标志物开展检测。对de Winter综合征和复发性肝癌(Recurrent hepatocellular carcinoma,RHCC)克隆起源开展早期诊断能有效帮助医生实施临床决策。特征心电图(electrocardiogram,ECG)是目前de Winter综合征进行早期诊断主