酶法水解大豆异黄酮甙及其生理活性的研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hblhzl_18
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本文以提高大豆异黄酮的生物活性为目的,从微生物中筛选出了一株高产大豆异黄酮糖基水解酶的菌株,并对其产酶的发酵条件、酶的分离纯化、酶的性质和酶法制备大豆异黄酮甙元的条件进行了系统的研究,同时对大豆异黄酮的提取条件、提取液的纯化方法和大豆异黄酮的生物活性(抗氧化活性、雌激素活性和抑菌活性)进行了探讨.对大豆异黄酮提取条件的研究结果表明,从脱脂豆粕中提取大豆异黄酮提取量高,蛋白提取量小的最佳条件是:乙醇浓度60%,提取温度70℃,物料比1:18,提取时间2h,提取次数2次.采用该方法从脱脂豆粕中可提取大豆异黄酮的量为0.45%.利用乙醇浸提的大豆异黄酮提取液,由于其中含有的大量蛋白质和可溶性碳水化合物等杂质,影响以后的分离和纯化,因此,本文研究了利用大孔吸附树脂进行初步分离纯化大豆异黄酮提取液的方法.为了大量制备高生物活性的大豆异黄酮甙元,本文从八株霉菌中筛选出了一种高产大豆异黄酮糖基水解酶的sp.R菌株,该菌产酶的最佳培养条件为:麦麸2.5%;硝酸钠0.5%;蛋白胨0.5%;起始pH7.0;250mL三角瓶装40mL培养基;接种量10%;培养温度30℃;摇瓶转数160rpm;培养时间84h.在此发酵条件下,sp.R菌株所产酶活力为82U/mL.发酵酶液经硫酸铵沉淀和DEAE-Cellocuse DE-52离子交换柱分离纯化,被纯化了¨倍,收率为10.9%.大豆异黄酮甙元(分别用酶解和酸解方法获得)和糖甙型大豆异黄酮的抗氧化活性和雌激素活性的测定结果为:酶解甙元达到IC<,50>和EC<,50>时的样品浓度分别为0.14 mg/mL和0.31 mg/L;酸解甙元达到IC<,50>和EC<,50>时的样品浓度分别为0.20 mg/mL和0.90mg/L;糖甙型大豆异黄酮达到IC<,50>和EC<,50>时的样品浓度分别为0.32 mg/mL和9.94mg/L.
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