双酚A(bisphenol A,BPA)是由两分子苯酚和一分子丙酮在酸性条件下催化缩合而成的酚类物质,其结构与天然激素17-B雌激素及人工合成的雌激素相似,为EDCs中的一种,是已确定的外源性雌激素。双酚A是PC的重要原料,许多日常消费品如食品包装容器、婴儿奶瓶等儿童用品都可能含有双酚A,双酚A在加热时能析出,进入到食物和饮料当中。近两年来双酚A引起了人们的高度关注。本文通过重氮法在双酚A中引入羧基,采用碳二亚胺法将双酚A半抗原与牛血清白蛋白进行偶联,合成双酚A免疫抗原,再采用混合酸酐法和卵清蛋白偶联得到包被抗原。用免疫抗原对BALB/c鼠进行免疫,经测定血清效价及特异性筛选有效免疫的小鼠。利用PEG法对小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,筛选效价高,亲合力好细胞株,经3次有限稀释亚克隆后建立稳定的细胞株。通过体内诱生腹水制备大量单克隆抗体,收集腹水并采用辛酸-硫酸铵沉淀法进行纯化,SDS-PAGE和紫外分光光度法鉴定抗体纯度和含量。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记双酚A单克隆抗体,依据免疫层析技术研制检测双酚A残留的免疫层析快速检测试纸条。实验结果：(1)经紫外扫描及SDS-PAGE鉴定成功合成了双酚A的人工免疫抗原及包被抗原,其中双酚A分子与BSA和OVA的偶联比分别为11：1和6.8：1。(2)获得稳定分泌抗双酚A抗体的杂交瘤细胞株,该抗体属于IgG2b亚型,轻链为K链。(3)用间接竞争ELISA检测双酚单克隆抗体的灵敏性,建立抑制标准曲线方程为y=15.851x-4.0353,线性相关系数R2=0.9903,64ng/m1-8192ng/ml之间有良好的线性,半抑制浓度IC5o为2567.22ng/ml。(4)交叉反应结果表明抗体对双酚A具有较好的特异性,与双酚酸的交叉率为9.6%,与其余结构类似物的交叉率小于0.01%。(5)用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,以金标双酚A单克隆抗体作为探针,将BPAH-OVA(检测线)和羊抗鼠IgG(质控线)分别包被在硝酸纤维素膜上,构建了间接竞争胶体金免疫层析检测体系(GICA)。标记探针中金溶胶最佳粒径为40nm,T线最佳包被抗原浓度为0.2μg/ml,C线上二抗浓度为0.2mg/ml,金标液的最佳稀释度为3倍稀释。(6)GICA目测检出限为1OOng/ml,检测时间为10-15min。试纸条对双酚酸、壬基酚、辛基酚等无交叉反应。结论：本研究制备的双酚A单克隆抗体,特异性相对较高,双酚A免疫层析试纸条的研制为双酚A进行现场快速检测的进一步研究奠定了基础。