获得一个来源于自身且高效的肌肉特异性表达启动子对于高产优质转基因肉牛的研究和培育具有重要意义。在前期研究中,本实验室已经验证了牛CMYA1为肌肉组织特异性表达基因。本研究在前期工作的基础上,深入开展牛CMYA1基因核心启动子的筛选,主要工作有克隆牛CMYA1基因启动子,验证其启动子活性和肌肉特异性表达特性。同时,通过CMYA1启动子缺失研究,筛选CMYA1基因的核心启动子序列,最终获得天然的牛CMYA1基因肌肉特异性启动子,为转基因动物的研究提供理想的实验材料,并为进一步揭示CMYA1基因的转录调控机理提供理论支持。本研究利用RT-PCR的方法对牛CMYA1基因的肌肉组织特异性表达进行验证,随后,通过添加外源酶切位点的方法克隆牛CMYA1基因启动子全序列(1155bp),然后构建pEGFP-1-CMYA1启动子载体,分别转染小鼠C2C12细胞以及牛成纤维细胞,在细胞水平验证CMYA1基因启动子活性及其肌肉特异性表达特性。为进一步筛选CMYA1基因的核心启动子,在CMYA1启动子5’端非翻译区进行缺失研究,设计获得8条CMYA1启动子缺失片段(分别命名为P1,P2,P3,P4,P5,P6,P7和P8),分别构建启动子缺失载体pGL3-basic-(P1-P8),与内参质粒pRL-TK共同转染小鼠C2C12细胞,最后开展双荧光素酶报告基因检测系统试验分析,筛选获得CMYA1核心启动子(P7),并构建核心启动子载体pEGFP-1-P7,分别转染小鼠C2C12细胞以及牛成纤维细胞,验证CMYA1基因核心启动子的启动子活性和肌肉特异性表达特性。本实验结果表明:1.牛CMYA1启动子序列为1155bp,具有启动子活性,在牛肌肉组织中特异性表达。2.牛CMYA1基因核心启动子序列为477bp,具有较高的启动子活性,可在肌肉中特异性表达。结论:位于牛CMYA1基因启动子序列(679-1155bp)的核心启动子序列长度为477bp,该序列具有较高的启动子活性,同时可在肌肉细胞中特异性高效表达,可作为外源基因的肌肉特异性启动子使用,为转基因动物外源基因的肌肉特异性表达提供导入媒介,具有重要的临床应用价值。