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【目的】
采用ISO药浴斑马鱼复制斑马鱼心衰模型,研究该模型心肌细胞凋亡及交感神经重构的情况。
【方法】
用浓度为0.02mg/ml的盐酸异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)分别在24、48、72及96hpf(hourspost-fertiliaztion,受精后......小时)4个时间点连续药浴斑马鱼,复制斑马鱼心衰模型;拍摄72hpf斑马鱼心脏搏动视频,运用视频和图像处理软件分别测量斑马鱼心室收缩期和舒张期的表面积、短径和长径,计算心室表面积改变率、短轴缩短率、长轴缩短率。计数24、48、72、96及120小时的心率,以评估斑马鱼心功能。TUNEL检测心肌细胞凋亡。运用斑马鱼整体免疫荧光和整体原位杂交技术检测酪氨酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase,TH),探究斑马鱼心脏的交感神经重构情况。
【结果】
1.斑马鱼心功能变化:ISO组斑马鱼心率在72hpf开始较对照组明显减慢,且与对照组比有显著差异(P<0.01)。48hpf斑马鱼心功能较对照组下降,具有统计学差异(P<0.05),提示斑马鱼慢性心衰模型复制成功。
2.斑马鱼心肌细胞凋亡:与对照组相比ISO组在48、72、96及120hpf4个时间点心脏都出现明显的凋亡信号,4个时间点的实验组与对照组间相比均有显著统计差异(P<0.01)。
3.交感神经分布:斑马鱼整体免疫荧光检测发现48hpf斑马鱼ISO组与对照组斑马鱼交感神经分布无明显差异(P>0.01),72、96及120hpf对照组交感神经分布较为集中,而ISO组交感神经分布散乱,分布面积增大(P<0.01)。原位杂交检测并未发现两组间交感神经表达有差异。
【结论】
1.用0.02mg/ml的ISO分别在24、48、72、96hpf4个时间点连续药浴斑马鱼,可在72hpf节点成功复制斑马鱼慢性心衰模型;
2.课题组在斑马鱼心衰模型中发现心肌细胞凋亡增加。
3.课题组发现免疫荧光检测心衰组斑马鱼交感神经分布与对照组相比,分布范围广,分布面积明显增大。原位杂交在基因水平上检测时未见两组间交感神经分布有差异。其机制有待进一步研究。
采用ISO药浴斑马鱼复制斑马鱼心衰模型,研究该模型心肌细胞凋亡及交感神经重构的情况。
【方法】
用浓度为0.02mg/ml的盐酸异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)分别在24、48、72及96hpf(hourspost-fertiliaztion,受精后......小时)4个时间点连续药浴斑马鱼,复制斑马鱼心衰模型;拍摄72hpf斑马鱼心脏搏动视频,运用视频和图像处理软件分别测量斑马鱼心室收缩期和舒张期的表面积、短径和长径,计算心室表面积改变率、短轴缩短率、长轴缩短率。计数24、48、72、96及120小时的心率,以评估斑马鱼心功能。TUNEL检测心肌细胞凋亡。运用斑马鱼整体免疫荧光和整体原位杂交技术检测酪氨酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase,TH),探究斑马鱼心脏的交感神经重构情况。
【结果】
1.斑马鱼心功能变化:ISO组斑马鱼心率在72hpf开始较对照组明显减慢,且与对照组比有显著差异(P<0.01)。48hpf斑马鱼心功能较对照组下降,具有统计学差异(P<0.05),提示斑马鱼慢性心衰模型复制成功。
2.斑马鱼心肌细胞凋亡:与对照组相比ISO组在48、72、96及120hpf4个时间点心脏都出现明显的凋亡信号,4个时间点的实验组与对照组间相比均有显著统计差异(P<0.01)。
3.交感神经分布:斑马鱼整体免疫荧光检测发现48hpf斑马鱼ISO组与对照组斑马鱼交感神经分布无明显差异(P>0.01),72、96及120hpf对照组交感神经分布较为集中,而ISO组交感神经分布散乱,分布面积增大(P<0.01)。原位杂交检测并未发现两组间交感神经表达有差异。
【结论】
1.用0.02mg/ml的ISO分别在24、48、72、96hpf4个时间点连续药浴斑马鱼,可在72hpf节点成功复制斑马鱼慢性心衰模型;
2.课题组在斑马鱼心衰模型中发现心肌细胞凋亡增加。
3.课题组发现免疫荧光检测心衰组斑马鱼交感神经分布与对照组相比,分布范围广,分布面积明显增大。原位杂交在基因水平上检测时未见两组间交感神经分布有差异。其机制有待进一步研究。