【摘 要】
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目的:分析circ＿ZFYVE1对MIN6胰岛β细胞的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:（1）使用同源性序列比方法比circ＿ZFYVE1在人和小鼠基因中的同源序列。（2）分别使用m RNA ZFYVE1引物和circ＿ZFYVE1引物对MIN6胰岛β细胞中的g DNA和c DNA进行PCR扩增,并采用琼脂糖凝胶电泳法检测circ＿ZFYVE1在MIN6细胞中的表达。对g DNA和c DNA的P
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目的:分析circ＿ZFYVE1对MIN6胰岛β细胞的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:（1）使用同源性序列比方法比circ＿ZFYVE1在人和小鼠基因中的同源序列。（2）分别使用m RNA ZFYVE1引物和circ＿ZFYVE1引物对MIN6胰岛β细胞中的g DNA和c DNA进行PCR扩增,并采用琼脂糖凝胶电泳法检测circ＿ZFYVE1在MIN6细胞中的表达。对g DNA和c DNA的PCR产物进行Sanger测序验证circ＿ZFYVE1的反向剪接位点。（3）MIN6细胞分为正常对照组（NC组）和高糖组（HG组）。NC、HG组分别在含有5.5mmol/L、25 mmol/L葡萄糖的DMEM完全培养基中培养48 h后提取RNA,应用q RT-PCR检测circ＿ZFYVE1表达水平。（4）慢病毒感染实验分为空载体组（sh-NC）、敲低环状质粒载体组（si-c ZFYVE1）和过表达环状质粒载体组（circ＿ZFYVE1）。sh-NC组使用空载体进行感染,si-c ZFYVE1组和circ＿ZFYVE1组分别使用敲低质粒和过表达质粒感染MIN6胰岛β细胞株。q RT-PCR检测感染后各组MIN6细胞系中circ＿ZFYVE1表达水平。（6）CCK8法、Ed U法检测细胞增殖。（7）流式细胞术检测各组细胞凋亡率。（8）Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3表达水平及胰岛素转录因子PDX1的表达水平,每组实验均独立重复3次。结果:（1）同源性序列比对结果显示circ＿ZFYVE1在人和小鼠中具有同源序列。（2）琼脂糖凝胶电泳结果显示circ＿ZFYVE1在c DNA中可被扩增,在g DNA中不能被扩增。Sanger测序结果显示MIN6中circ＿ZFYVE1序列与circbase序列一致。（3）q RT-PCR结果显示,HG组circ＿ZFYVE1表达水平明显低于NC组（P＜0.05）。（4）慢病毒感染结果显示,与sh-NC组比较,si-c ZFYVE1组circ＿ZFYVE1表达量降低,circ＿ZFYVE1组circ＿ZFYVE1表达量升高（P＜0.05）。（5）CCK8细胞增殖实验及Ed U结果显示,与sh-NC组相比,si-c ZFYVE1组在24h、48h的增殖活力及Ed U阳性率减低,circ＿ZFYVE1组在24h及48h的细胞增殖活力及Ed U阳性率升高（P＜0.05）。（6）流式细胞术结果显示,与sh-NC组相比,si-c ZFYVE1组凋亡率升高,circ＿ZFYVE1组凋亡率减低（P＜0.05）。（7）Western bolt结果显示,与sh-NC组相比,si-c ZFYVE1组Caspase-3表达增加（P＜0.05）,PDX1表达水平差异无统计学意义。Circ＿ZFYVE1组Caspase-3表达水平减低,PDX1表达水平升高（P＜0.05）。结论:Circ＿ZFYVE1通过促进MIN6胰岛β细胞增殖、减少其凋亡,以及促进胰岛素转录因子PDX1表达,从而参与胰岛β细胞的功能调控。
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