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背景: 小脑是中枢神经系统的基本组成部分,参与运动协调、认知处理和感觉辨别等。小脑髓母细胞肿瘤是最常见的儿童神经系统肿瘤,其产生被认为和小脑发育异常有关。在出生后早期,Sonic Hedgehog(SHH)信号通路是促进颗粒神经元祖细胞快速增殖的关键信号通路。转录因子Math1也是小脑发育过程中重要的因子,它特异地表达在增殖的神经元祖细胞中,通常被当做外颗粒层的标志物。本文主要的研究对象Storkheadbox1(Stox1)属于Forkhead转录因子家族,在神经系统中表达丰富,并和阿兹海默征有密切联系。 目的: 目前,对于调控小脑发育和髓母细胞瘤形成的信号通路和重要分子的认知还十分有限。本实验旨在探索Stox1在小脑发育和小脑肿瘤中的作用及其相关机制。 方法: (1)利用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术研究 Stox1在发育小脑和Ptch+/-小鼠自发肿瘤中的表达情况。 (2)利用percoll梯度离心法分离纯化小脑颗粒神经元祖细胞,在体外感染 Stox1过表达或敲低的腺病毒,通过荧光定量PCR、免疫荧光染色和EdU实验探究Stox1在颗粒神经元祖细胞分化和增殖过程中的作用。 (3)借助带有荧光或荧光素酶标记的Math1增强子质粒和ChIP技术,在体外研究Stox1和Math1增强子之间的关系。 (4)通过体内成瘤实验研究Stox1在髓母细胞瘤生长过程中的作用。 结果: (1)在出生后的发育小脑中,Stox1主要表达在外颗粒层的神经元细胞中。 (2)Stox1促进小脑颗粒神经元祖细胞的分化。 (3)Stox1是Math1的转录抑制子,并受SHH信号通路调控。 (4)过表达Stox1抑制Ptch+/-小鼠肿瘤细胞在体内的增殖。 结论: 在颗粒神经元祖细胞的分化过程中Stox1的表达不断升高,而激活的SHH信号通路则抑制其表达。Stox1在促进小脑颗粒神经元祖细胞的分化和抑制髓母细胞瘤生长中起着重要作用。Stox1通过转录抑制Math1发挥其促进神经发生和抑制肿瘤生长的作用。综上所述,本论文主要阐述了SHH-Stox1-Math1调控轴在正常小脑发育和髓母细胞瘤形成中的作用。