蒸汽闪爆处理牦牛角粉制备多元纳米凝胶的研究

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随着家畜屠宰量的逐年增多,屠畜副产品的开发利用是兽医公共卫生面临的严峻挑战。根据国家肉牛牦牛产业技术体系报告:2022年中国牦牛屠宰量为300万头。牦牛屠宰副产品牦牛角存量大,代谢缓慢,易造成环境污染。唐代孙思邈《千金要方》记载的“千金犀角散”,主治痈疽热毒内攻,喉舌生疮等有奇效。现代中兽医理论认为犀牛角粉有清热解毒、凉血安神的功效。我国犀角已被禁止作为药物来使用,能否用牦牛角来代替?另动物外伤大多数是开放性的感染创,很难及时发现保定清创,往往导致动物感染死亡。为了探讨用牦牛角代替犀角,开发消毒效果好并能有效预防动物外伤感染的纳米凝胶,本研究拟采用蒸汽闪爆技术处理牦牛角粉,通过蛋白质结构解析,利用高生物相容性及透皮特性的角蛋白纳米颗粒为递送单元,戊二醛为交联剂,黑水虻壳聚糖作为阳离子配体分子,组装多元纳米凝胶。既可用于皮肤、黏膜和创面消毒处理,也可涂抹于开放性的感染创面形成一层薄膜,释放的壳聚糖能够抑制细菌繁殖,角蛋白可促进创面愈合。为了进一步验证该凝胶的临床效果,选用较难治愈的小鼠糖尿病皮肤溃疡动物模型,实现凝胶对皮肤伤口的防感染促愈合作用。实验结果如下:(1)蒸汽闪爆处理后的牦牛角蛋白溶解度增大,酶解特性改善,生物利用率提高。牦牛角蛋白在蒸汽闪爆处理后保留了大部分的蛋白质骨架,二硫键和氢键断裂,α-螺旋、β-转角结构解构明显;增加了角蛋白的水溶性和酶解的可及性,牦牛角蛋白溶解度达到9.6%;使用深共晶溶剂提取较传统碱性水解收率更高,达到86.4%。(2)蒸汽闪爆是制备壳聚糖纳米颗粒的较为理想方法。区域粒度扫描显示,在1.60 MPa的压力处理下,平面的纳米颗粒尺寸范围为59~162nm。通过脱乙酰化黑水虻几丁质可以获得高纯度的壳聚糖(脱乙酰度91.24%),同时保持聚合物骨架。该几丁质材料的配体活性得到了提高,材料的温度敏感性也得到了改善。(3)制备的5种牦牛角蛋白多元纳米凝胶均有预防感染促进创口愈合的效果。5种不同流变性的“牦牛角蛋白-戊二醛-黑水虻壳聚糖”组装凝胶,C980组凝胶的促DM小鼠伤口闭合效果最为优异,在3~12天的短周期内,伤口闭合率达到73.48%,其次是Gel 0.5%组,伤口闭合率为66.22%,C21组为55.28%,Gel 1.0%组为33.89%,C2020组为25.85%,与未用药DM小鼠组19.53%的伤口闭合率相比,5组凝胶都有较为明显的促糖尿病足溃疡愈合的效果。结论:用牦牛角替代传统中兽药犀角,结合蒸汽闪爆技术和多元纳米组装工艺制备牦牛角蛋白消毒凝胶和外伤防感染凝胶技术上是可行的,该系列产品使用方便,无刺激,药效持久,抑菌效果好,促伤口愈合能力强,为牦牛屠宰副产品牦牛角的高值化利用开辟了一条新途径。
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